分子克隆中常用的末端转移酶来源于小牛胸腺，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的 DNA 聚合酶，是一种不依赖于模板的 DNA 聚合酶。在二价阳离子存在下，末端转移酶催化 dNTP 加于 DNA 分子的 3' 羟基端。若 dNTP 为 T 或 C ，此二价阳离子首选 CO²⁺ ；若 dNTP 为 A 或 G 此二价阳离子首选 Mg²⁺ 。
    作为该酶底物的 DNA 可短至 3 个核苷酸，对 3' 羟基突出末端的底物作用效率最高。在离子强度低时，带 5' 突出端或平端的 DNA 也可作为底物，但效率低。因此，该酶可在 cDNA 或载体 3' 末端加同聚尾用于克隆；也可用标记的 rNTP、 dNTP 或 ddNTP 来标记 DNA 片段的 3' 末端。
    在不同条件下，该酶所形成的同聚尾的长度是不同的，与 dNTP 对 3' 羟基的摩尔比和 dNTP 的种类有关（表 2-5）。反应一般是在 37℃ 作用 15 分钟，随时间的延长尾亦延长。(http://www.ebiotrade.com/)
     表 2-5  末端转移酶形成的同聚尾的长度

pmol 3'-OH:mM dNTP	dA	dC	dG	dT
1:0.1	1～10	1～5	1～5	1～10
1:1.5	10～30	10～30	10～20	10～35
1:3.0	100～200	100～200	15～35	200～250
1:15	400～500	400～500	15～35	300～400