简介：DNAZOL基因组DNA提取试剂

DNAZOL是完全的、即可使用的分离基因组DNA的试剂。DNAZOL BD 是特别设计用于从血液中分离基因组DNA的试剂，而PLANT DNAZOL则特别设计用于植物。使用DNAZOL分离得到的基因组DNA可用于限制性酶切、SOUTHERN转印、分子克隆和PCR。

●可用于组织、细胞或血液

●可在30-60分钟内完成全部操作程序

从格兰氏阴性细菌中提取基因组DNA

细胞壁的存在是从细菌中快速有效地分离基因组DNA的主要障碍。传统的方法是使用蛋白酶K和溶菌酶破碎细胞壁，然后用酚抽提和乙醇沉淀以去除蛋白质。用RNA酶处理并再次酚抽提和乙醇沉淀以去除RNA。按这种程序从细菌培养物中提取基因组DNA至少需要4小时时间。

DNAZOL是用于从动物来源中分离基因组DNA的试剂，它是将高pH值和胍盐结合起来在一个步骤中裂解细胞并水解RNA，经过乙醇沉淀后即可快速得到基因组DNA。但是破碎细胞壁的物理操作仍比较复杂，而且提取的效率也不足够高。在这篇报告中，我们描述了一种将DNAZOL和溶菌酶结合起来从格兰氏阴性细菌中快速有效地分离高品质的基因组DNA的方法

方法：基因组DNA 是从 E. coli (DH5α和DH10β细胞)和A. tumefaciens(LBA4404)中提取的。接种4mL甘油冻存的细菌到4mL的LB培养基中，在37℃16小时（E. coli）或30℃40小时（A. tumefaciens）摇动培养至饱和密度（OD660>1.1）。

（1）如以前所描述的方法，从1.5ml的饱和培养物中使用溶菌酶/酚/RNA酶A来分离基因组DNA。简单地说，将细胞离心后加入1mlTES/蔗糖/溶菌酶[20mM Tris-HCl(pH8.0),1mM EDTA(pH8.0),50mM NaCl, 8%蔗糖，1mg/ml溶菌酶]，振荡20秒以悬浮细胞。室温保温5分钟，加入100μl 10%SDS以终止反应。混合物用等体积的酚/氯仿/异戊醇抽提，并用0.1倍体积的乙酸钠和1倍体积的异丙醇沉淀。用70%的乙醇清洗后，将沉淀通过在37℃加热溶解在500ml的TE中。沉淀溶解后，加入50ng的RNA酶A在37℃保温10分钟。重复酚抽提/异丙醇沉淀/70%乙醇清洗的步骤，并最终将沉淀溶解在100ml的TE中。

（2）另外一种方法则是使用溶菌酶和DNAZOL。将1.5ml的饱和培养物离心后加入300ml TES/蔗糖/溶菌酶，振荡20秒以悬浮细胞。在室温保温15分钟后，加入3ml的DNAZOL，振荡20秒。将混合物在室温下以15,000*g离心10分钟去除不溶性的细胞碎片。加入95%的乙醇，倒置几次，15,000*g室温下离心2分钟以沉淀基因组DNA。用3ml 95%的乙醇清洗两次后将沉淀溶解在100ml的8mM的NaOH中。

结果和讨论

使用两种方法得到的基因组DNA其OD260/OD280比值是相似的，但用DNAZOL/溶菌酶的方法明显比用酚/RNA酶的方法得到更高的产量（表1）。而且使用DNAZOL/溶菌酶的方法只需1.5小时，而酚/RNA酶的方法需要4小时。这些时间不包括为确保基因组DNA的溶解而在37℃过夜保温的时间。如果使用DNAZOL而不加入溶菌酶则得不到可检测水平的DNA。由于基因组DNA的分子量较高而在琼脂糖电泳中有一点拖带（图1）。 表1. 使用两种方法得到的基因组DNA Strain Phenol/RNase A Method(μg) Ratio (OD260/OD280) DNAZOL® Reagent Ratio (OD260/OD280) DH5a™ 15 2.0 86 2.1 DH10B™ 10 2.1 25 2.2 LBA4404 19 1.8 24 1.8 总的来说，结合使用溶菌酶和DNAZOL是自格兰氏阴性细菌中提取基因组DNA的快速有效的方法。而且这种方法避免使用酚等有机物。这种程序也可在1.5ml离心管中进行。由于这种方法要求的操作也比较少，因此适用于高通量的应用。(http://www.ebiotrade.com/)