来源： 源于E.coli C600 pcl857 pPLc28 lig8 (2)。
应用：
- 限制性酶切片段的克隆 (3)。
- 将linker或adapters 连接到DNA片段的平滑末端。
反应缓冲液： 1X T4 DNA Ligase Buffer:
[50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 10 mM DTT, 1 mM ATP, 25 µg/ml BSA, (pH 7.5 @ 25°C)]。推荐DNA浓度(0.1 - 1 µM 的5′末端)。
使用注意：ATP是反应必须的辅因子。这一点与要求NAD作辅因子的大肠杆菌DNA连接酶不同。
如在反应体系中补加1 mM的ATP，连接反应还可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液(NEBuffers)或在T4 DNA多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。
质量保证： 无核酸内、外切酶污染。每批T4 DNA连接酶均通过模拟克隆实验进行检测，该实验可以检测出待连接DNA末端的任何破坏。结果表明>99.9%的DNA末端未受任何降解。
单位定义(粘性末端活性单位）：在20µl连接反应体系、0.12µM (300µg/ml)的5'-末端浓度条件下，16°C反应30分钟，能使50% 的经Hind Ⅲ消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个NEB单位。
一个粘端连接活性单位=0.015个韦氏（ATP-PP交换）单位(4)。
一个韦氏单位=67个粘端连接活性单位。
浓度：400,000 units/ml和2,000,000 units/ml。
贮存条件： 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 µg/ml BSA和50%的甘油，-20°C贮存。
热失活条件: 65°C 加热10分钟。
室温连接反应：为方便起见，连接反应可以在室温（20-25°C）条件下进行。粘性末端连接：在20µl反应体系中加入1µl T4 DNA连接酶，反应10分钟。平滑末端连接：在20µl反应体系中加入1µl T4 DNA 连接酶反应2小时，或者加入1µl高浓度T4 DNA 连接酶反应10分钟。(http://www.ebiotrade.com/)
