- 重组酶
- 随酶提供10×反应缓冲液
- 随酶提供 2 mg DNA对照
概述：Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组(1)。本酶无需能量辅助因子，Cre-介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡(2)。loxP识别元件是一34bp序列，其两端是两个13 bp的反向重复序列，中间是起定向作用的8 bp间隔区(3)。重组产物根据loxP位点的位置和相对方向而不同，两个含单loxP位点的DNA将被融合。两个正向重复loxP位点间的DNA 将以环状形式切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。
来源：纯化自重组大肠杆菌，其中携带有编码细菌噬菌体P1 Cre重组酶的质粒，酶的N端添加了一丙氨酸和一甘氨酸残基(4)。
应用：
- 两个loxP位点之间DNA的切割
- 含loxP位点DNA分子的融合
- loxP位点之间DNA序列的翻转
反应缓冲液： 1×Cre Recombinase Reaction Buffer
33 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2。37°C温育。
使用注意：建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将Cre重组酶反应混合物于70°C温育10分钟。
对照DNA：线性化pLox2+长3.65 kb, 距两端350 bp远处各有一loxP位点。两loxP位点之间有一复制原点和一氨苄青霉素抗性基因。loxP位点之间的重组产生一个环状的氨苄青霉素抗性质粒（0.8%琼脂糖凝胶电泳约1.7 kb大小）和一个700 bp长的DNA片段。
单位定义：在50 µl反?µ逑担?7°C 30分钟条件下，使0.25 µg的pLox2+对照DNA产生最大位点特异性重组所需要的酶量定义为一个单位。最大重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后行氨苄抗性平板筛选。
浓度：1,000 units/ml。
贮存条件： 250 mM NaCl (pH 8.0), 15 mM HEPES和50%甘油。-20°C贮存。
热失活：70°C 10分钟。(http://www.ebiotrade.com/)
图1 ：Cre/loxP位点特异性重组
参考文献:
1. Abremski, K. and R. Hoess (1984) J. Biol. Chem. 259, 1509-1514.
2. Abremski, K. et al. (1983) Cell 32, 1301-1311.
3. Metzger, D. and Feil, R. (1999) Curr. Opin. Biotechnol. 10, 470-476.
4. Cantor, E. and Chong, S. (2001) Protein Expression and Purification 22, 135-140.
