| 表达：His、Strep、GST是经常用到的标签。选择了标签，也就决定了后续纯化时使用的亲和层析填料。值得一提的是，有时可以采取快速的方法进行第一步亲和层析。在细胞破碎阶段，直接加入去垢剂来溶解膜蛋白（不需要提前分离细胞膜），通过此法得到的上清可直接用 HisTrap FF crude 预装柱进行纯化，缩短实验时间。 |
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増溶：选择合适的去垢剂才能使膜蛋白本身保持空间构象和活性。去垢剂包括非离子型、离子型和两性离子型三种，常规使用的种类达数十种。哪种是最合适的呢？你的膜蛋白说了算！科学快速筛选有妙招：选用5/150型号的分子筛预装柱，准备5-50µl的样品，运行流速设为 0.5 ml/min，15 min以内就可以筛选一个去垢剂，省时省力省样品！ |
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纯化：分辨率、耗时多少和处理量是选择层析柱的关键考核因素。分辨率高、流速快、处理量大的Capto HiRes系列离子交换层析柱，是很多小伙伴心中的one pick! 为了保证良好的分离效果，请注意离子交换实验中的buffer环境：阴离子交换实验中不要添加阴离子型去垢剂，阳离子交换实验中则不能加入阳离子型去垢剂，以免影响层析柱载量。如果需要快速置换缓冲液环境，可以选择HiTrap Desalting 5 ml 或 HiPrep 26/10 Desalting 53 ml脱盐柱。 |
