GE生命科学消耗品快讯
2010年10月,第6期

热点应用
 

>> 用于结晶和3D结构测定的一种不稳定的氧敏感酶的纯化
      摘要:应用ÄKTAFPLC开发了一种用于参与头孢菌素/头霉素生物合成的脱乙酰氧基头孢菌素C合成酶(DAOCS)快速纯化的程序。通过自动筛选不同的层析填料和梯度优化开发方法。最终的方法包括Q Sepharose XL的离子交换层析、SOURCE 15ISO的疏水作用层析和Superdex 75 prep grade的凝胶过滤层析。此程序产生10mg纯的活性DAOCS,它被用于结晶和随后的3D结构测定。

>> 采用HiTrap HIC Selection试剂盒对可放大的重组EGFP中间纯化步骤进行快速筛选
       摘要:本文中我们采用HiTrap™ HIC Selection试剂盒,配合使用Butyl Sepharose High Performance(同HiTrap Butyl HP)对七个具有不同疏水特性的1 ml HIC柱进行筛选。本次筛选的目的是根据设定的过程目标对重组绿色荧光蛋白(EGFP)的中间纯化步骤进行筛选,以获得最适的介质和操作条件组合。设定的过程目标包括了高分辨率和高收率(至少80%)以及动态吸附容量至少达到20 mg蛋白/ml介质,同时还对工艺的放大提出要求。

新产品应用

>> 利用高通量方法的吸附平衡等温线研究
     摘要:介绍了利用PreDictor™ 96孔板和辅助软件测定吸附等温线的方法。PreDictor过滤板被设计用于层析工艺开发的条件筛选,而辅助软件支持实验的多变量设计以及所收集的数据就质量平衡、吸附等温线评估和不同类型图的评估。

>> 在单克隆抗体纯化工艺中高通量筛选和优化 Protein A 的捕获步骤
     摘要:我们为MabSelect SuRe(一种基于Protein A的亲和层析填料)上单克隆抗体的纯化开发了一种捕获步骤,并进行优化。ProDictor预填充96孔板的使用让我们能探索广阔的实验空间,以便为捕获步骤找到最佳条件。一旦鉴定出这些条件,便在ÄKTA™ 设计系统的HiScreen预装柱中进行微调和验证。最终开发出放大步骤,并在可靠的生产条件下检验。本应用指南中描述的步骤代表了高通量工艺开发的高效、可靠方案。

>> 使用ÄKTA™ avant 25层析系统对天然蛋白纯化的快速方法开发
     摘要:由UNICORN™ 6软件控制的ÄKT avant 25系统被用于开发3步层析方法,用于从大肠杆菌中纯化天然的麦芽糖糊精结合蛋白。HiScreen™ 层析柱被用于Design of Experiments (DoE)以确定捕获步骤的最佳上样条件。在开发捕获步骤中,平衡、洗涤和洗脱期间的盐浓度和pH使用BufferPro在线缓冲液配制自动控制。使用HiTrap™ HIC Selection Kit进行中间纯化步骤的层析填料筛选。最后,通过GF的精细纯化确保剩余杂质的去除,产生的目标蛋白的纯度接近100%。在捕获步骤的优化和用于中间步骤的HIC填料筛选后,整个纯化过程在一天内进行。

>> HiScreen预装柱
     摘要:HiScreen层析柱是GE Healthcare提供的工艺过程开发平台的一部分。这类层析柱预装一系列BioProcess填料,被设计用于进行方法优化和参数筛选。HiScree层析柱的柱床体积很小(4.7 ml),减少了样品和缓冲液的消耗。在HiScree层析柱中使用的填料还可用于其它类型的层析柱均有大包装层析填料,用于从工艺开发到常规生产的不同规模的纯化。


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