生物通

您所在位置:生物通首页 > 今日动态 > 专题总汇 > 2012技术回顾:PCR & dPCR & qPCR

导语:
       
明年将是聚合酶链式反应(PCR)技术诞生三十周年。这项技术不仅带来了一位诺贝尔奖得主,也使生物学和医学研究领域发生了革命性的变化。它被广泛应用于基因扩增、传染病诊断、遗传疾病鉴定等方面。

       经过多年的发展,PCR技术越来越完备:变性、退火、延伸,美妙的三部曲。然而,这并不意味着它就是静态的。许多PCR步骤逐渐被改进,如试剂优化、引物设计优化、产量提高、扩增片段延长、保真度提高、多重反应、定量PCR的发展,这些方面的技术进步极大的拓宽了我们选择性扩增DNA的能力,为许多下游应用提供了更为精确的产物。在即将过去的2012年,有哪些新产品,又有那些新进展?跟随生物通,一个都不错过!




新品回顾

2012新品回顾:PCR & qPCR系统
在PCR方面,2012年最吸引眼球的当属数字PCR了吧。这一技术频繁出现在各大杂志上,也获奖无数。新的平台不断出现,为古老的PCR领域注入了新的活力。今年有哪些新产品上市,它们又应用在哪些方面,且看本文。

聚焦三大数字PCR平台
数字PCR技术,是通过将微量样品作大倍数稀释和分液(partitioning),直至每个样品中所含有的待测分子数不会超过1个,再将所有样品在相同条件下进行PCR扩增,并对发生了扩增反应的样品逐个进行计数的一种技术。

RainDrop 数字PCR系统新上市
美国RainDance Technologies公司在4月上推出了RainDrop? 数字PCR系统。这一新系统在PCR分析的灵敏度、多重分析和绝对定量方面表现优异。它能够在一个工作日产生超过10亿个反应,从而将数字PCR的应用扩大到更多的领域,包括低频率的肿瘤等位基因检测、基因表达、拷贝数变异等。

NEB推出超高保真的DNA聚合酶
New England Biolabs(NEB)公司推出了一种性能强劲的DNA聚合酶——Q5超保真DNA聚合酶。它不仅带来了极为出色的保真度,还确保了各种扩增子的可靠扩增,而无论其GC含量如何。

单细胞的可靠全基因组扩增
全基因组扩增的目的是在没有序列偏向性的前提下大幅增加DNA的总量。之前常用的技术有DOP-PCR和PEP-PCR等。然而,这些基于PCR的方法会产生非特异的扩增假象,影响实验结果。为此,QIAGEN推出了全基因组扩增产品REPLI-g Single Cell Kit,让研究人员在使用测序和芯片平台时能获得值得信赖的结果。

Ion Ampliseq™ 千重PCR测序技术
美国Life Technologies公司在2011年推出快速,简单和可延展的Ion Torrent半导体测序仪,以及在此平台上实现的Ion Ampliseq™千重PCR测序技术。该技术 可实现一管同时扩增几千种PCR片段,每管只需10ng DNA样品,包括FFPE样品。

罗氏LightCycler®家族推出最新款实时荧光PCR仪
2012年底,罗氏诊断新推出一款实时荧光定量PCR仪--LightCycler® 96,这款系统的出现丰富并完善了罗氏生命科学领域的LightCycler® 实时定量PCR家族产品线。该系统集多重优秀性能为一体,现今已同步在中国上市,并将在罗氏诊断应用科学部2013年的3-4月的全国巡回技术研讨会上隆重亮相。


技术盘点

2012回顾:PCR技术的效力与进展
自近30年前PCR技术推出以来,其已成为分子生物学的一项基本实验室技术。最初只需要少数几种试剂、一个热源和手动热循环计时,自那时起PCR技术推动了一个行业,自动化和改善热循环,开发实时定量检测扩增反应的仪器,以及提高聚合酶的性能。

PCR技术年度盘点:2013年新趋势
今天,PCR广泛应用于生态,取证和食品安全等领域,同时也是分子生物学研究基础实验的重要组成元素。那么在未来一年里,PCR技术又会出现哪些方面的进步呢?

2013年PCR的技术热点
今年dPCR发展迅猛,在4月份,RainDance Technologies公司推出了一种新型液滴平台,这一平台能进行多重dPCR反应,将每天的反应通量提高到了一亿个反应。在未来的一年里,这种技术还将取得更多的进步。

数字PCR助力艾滋病疗法的开发
Bio-Rad公司于去年底推出了QX100微滴式数字PCR系统,市场反应不错。最近,Sangamo BioSciences公司的研究人员利用此系统产生了高度精确且重复的数据,离HIV功能疗法的开发又近了一步。


实验指南

SYBR法实时定量PCR优化指南
SYBR Green法实时定量PCR比探针法成本低,使用也更为方便。不过该方法也存在着与生俱来的弊端,SYBR Green法产生的非特异性产物较多,会导致高背景和假阳性。当然供应商们也各展所长,开发了各式各样的产品来帮您优化这一qPCR的经典方法。

攻克多重PCR之难
多重PCR能够在提高通量的同时节省样品降低成本,它需要耗费更多的时间和精力,同时也会给用户回报更丰富的数据。本文介绍了一些实验技巧和商业化工具,希望能帮您轻松获得好结果。

专家经验谈:如何开展单细胞qPCR分析
如今,单细胞基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学研究不再是遥不可及。利用新兴的微流体方法和分子生物学技术,研究人员逐渐能从群体噪音中提取单细胞信号。《Genome Technology》杂志请来了一些专家,来分享他们在单细胞分析上的经验。




版权所有 生物通
Copyright© 2000-2011 eBiotrade.com, All Rights Reserved
联系信箱:info@ebiotrade.com