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CRISPR基因编辑技术是近年来生物技术领域的热点,已经被广泛应用于获得基因敲除(Knockout)突变,但众多事实表明该技术在基因敲入(Knockin)的应用上还是非常具有挑战的。在这方面,Takara重磅推出了CRISPR基因敲入解决方案,助力CRISPR基因编辑技术在基因敲入研究方面的应用,与您共同推动基因敲入研究。

Takara ssDNA制备技术,助力《Nature》T细胞基因改造突破性研究

单链DNA作为CRISPR基因敲入供体模板,具有非特异性整合概率低、细胞毒性低的特性,可以轻松实现准确CRISPR基因敲入。然而,一旦单链DNA的长度超过了 200 b,
其合成费用就变得非常昂贵,也易出错。Guide-it Long ssDNA Production System可制备0.5-5 kb的单链DNA,经济、简便、错误率低,是基因敲入研究科学家们的智慧之选。



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轻松实现准确CRISPR基因敲入的奥秘


2018年7月,《Nature》发表突破性研究,Alexander Marson教授和他的同事们开发了一种高效、非病毒介导的T细胞基因改造方法。在这项研究中,作者使用了Guide-it Long ssDNA Production System成功高效地制备出了单链DNA HDR模板,并用于T细胞基因改造方法的研究。作者指出,与双链DNA相比,单链DNA所带来的细胞毒性和脱靶整合率更低。


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基因编辑后基因突变检测试剂盒,比Cel1酶更灵敏、更特异

Guide-it Mutation Detection Kit可以用于检测由CRISPR/Cas9、ZFNs、TALENs等工程核酸酶所导入的基因突变。其中,性能卓越的Terra PCR Direct Polymerase Mix可直接以细胞、动植物组织为起始进行扩增,无需提取基因组DNA;与Cel1酶相比,Guide-it解离酶的特异性更高,检测灵敏度更高(相差5倍以上)。


 

 

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随时轻松检测单核苷酸替换,不依赖表型,不依靠测序

利用基因编辑技术在特定的基因组位点导入单核苷酸替换,去模拟与人类疾病相关的单核苷酸多态性(SNPs)或者形成终止密码子以实现准确的基因敲除。然而,要从数以百计的克隆中筛选出目的细胞克隆,这仍然是一个挑战,尤其是在没有相应的表型的情况下。Guide-it SNP Screening Kit可4小时轻松筛选,无需测序。


以G>A替换(野生型鸟嘌呤编辑为腺嘌呤)为例。 基因编辑后,当基因编辑成功发生时,杂交产物为double-flap结构,可以释放出荧光信号;当没有发生基因编辑时,形成的杂交产物带有缺口,不能释放出荧光信号。


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CRISPR基因编辑后单核苷酸替换检测,就是这么简单!

点击下载:Takara Guide-it™ CRISPR基因敲入解决方案

 

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Takara Guide-it™ CRISPR/Cas9基因编辑完整解决方案

 

 

讲座视频>>基因组编辑实验中一种快速可靠的SNP筛选方法

在本次讲座中,IMontse Morell博士 (Takara Bio USA, Inc.) 主要介绍了Guide-it SNP Screening Kit,这是她开发的一种可以快速准确地检测单核苷酸替换,确认基因编辑细胞中是否成功发生了HDR的解决方案。同时,她也阐述了该方法在使用iPSCs建立疾病模型方面的应用。


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