High Resolution Melt (HRM)是一种最新的遗传学分析手段,它根据目标DNA序列的长度、GC含量及碱基的互补性差异,利用高分辨率的熔解曲线对样品的基因型进行分析,其分辨精度可达单碱基差异样品,其中包括最难以区分的第四类SNP。 由于每一段DNA都有其独特的序列,因而也就有了独特的熔解曲线形状,如同DNA指纹图谱一样,具有很高的特异性、稳定性和重复性。根据它们独特的熔解曲线,就可以对不同的核酸片段进行区分。 用HRM分析样品时,待测样品先进行一次常规的染料法定量扩增,紧接着一步高分辨率熔解,既而便可通过熔解曲线的形状判断样品的基因型。由于这种分析方法完全是根据DNA的序列、碱基的物理性质来进行区分,因此,简单的说,只要有了扩增产物,就可以对其基因型进行分析,大大简化了后续的操作。
       基于这种检测原理,HRM检测不受突变碱基位点和种类的局限,既可以对未知突变进行筛查、扫描,又可以对已知突变进行分析。所以,相比定量探针法的突变分析和其它类型的快速突变分析法,其应用面大大拓展,在使用成本上也大大降低,这两方面的优势使其具有极强的可操作性,成为近年来国外新兴的遗传学、方法学研究和应用热点。
       目前HRM的热点应用集中在对未知新突变的扫描、筛查疾病相关突变/SNP、等位基因频率分析等。其它方面的应用,如器官移植的HLA配型 、物种/品种鉴定、甲基化研究,甚至法医学鉴定、亲子鉴定等也日渐兴盛。
       常规定量PCR仪的熔解曲线,基于温控方面的问题,不具备足够的分辨率,无法区分诸如单核苷酸多态性、单碱基插入/缺失这些在熔解温度上差异很小的序列。所以用于HRM分析的仪器必需具备以下几个必需的性能:极高的温度分辨率、高强度特异的激发光源、极佳的管间温度均一性、高速的数据采集。Rotor-Gene 6000正是为了满足这种新兴的遗传学分析方法对仪器性能的苛刻要求而应运而生的,其温度分辨率可达±0.02℃。Rotor-Gene 6000首次将定量扩增与HRM整合在一起,从原始模板开始,一步得到HRM分析结果。Rotor-Gene 6000因其创新设计和性能上的卓越表现受到了国际权威机构的首肯,它的生产商Corbett Life Science公司也因此荣获了2006年度Frost & Sullivan技术创新奖(详见>>)。
 
  Rotor-Gene 6000性能指示:
均一性:±0.01℃
分辨率:±0.02℃
升温速率:10℃/秒
每通道独立高能发光二极管(LED)
每通道独立发射光滤光片
光电倍增管(PMT)
Rotor-Gene 6000仪器规格:
6200 2-Plex
6200HRM 2-Plex + HRM(配备HRM功能)
6500 5-Plex
6500HRM 5-Plex + HRM(配备HRM功能)
6600 6-Plex

 
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