血清/血浆中microRNA准确检测的必备利器
 
      大量研究表明，血液循环中的microRNA表达变化指征着疾病的发生和发展阶段。由于血液样品在临床易于获取，且稳定不易降解，使得microRNA成为国际上众多疾病研究、药物毒性、机体损伤研究筛选biomarker的重要对象。

概览：
 
• 覆盖最全面：在血清/血浆样本microRNA PCR检测的同类产品中，Exiqon microRNA PCR芯片覆盖的microRNA数目最多、最全面
• 先进的LNA™专利技术：经LNA™优化的PCR引物，可有效区分microRNA间的单碱基差异，并能区分成熟和前体microRNA，同时使背景信号值最小
• 独特的Universal RT反应：只需一次逆转录反应（RT）就能检测芯片上的所有microRNA；起始含量低至5个拷贝的microRNA也能准确检测
• 一次性准确检测多达742种microRNA分子：Exiqon microRNA PCR芯片可实现一次性准确检测最多742种人的microRNA，375种小鼠/大鼠的microRNA，还可按照客户要求灵活定制个性化的microRNA PCR芯片，从而用于快速准确的microRNA标记物筛选

PCR技术检测血清/血浆样本中microRNA的挑战
  • 血清血浆中不包含细胞，且microRNA含量低
• microRNA高度同源，例如hsa-let-7家族各成员
• 红细胞破裂发生溶血后，会释放抑制RT和PCR反应的物质
• 常用的内参U6，在血清/血浆中含量不稳定，不适合作为血清/血浆PCR的内参对照基因

克服这些难点，需要高性能的microRNA PCR体系。大量实验结果表明：Exiqon miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR系统能可靠地检测血清/血浆样本中的microRNA，并用于各种癌症、神经系统疾病、免疫病等的microRNA标记物筛选。（图1）

Exiqon microRNA PCR芯片是准确检测血清/血浆中microRNA的必备利器
基于LNA™专利技术的PCR扩增
上、下游引物均针对microRNA序列设计的，并且都掺入了LNA™分子，从而实现：
  • 超强的分辨能力，能区分只有单碱基的差异的microRNA
• 提高灵敏度，降低背景噪音，精确检测血清/血浆中microRNA（图2）
独特的Universal RT反应
一次逆转录反应（RT）就能将芯片内所有的microRNA转录成cDNA，从而实现：
  • 节省珍贵的样本，尤其适用于血清/血浆、FFPE、LCM等RNA含量低的样本
• 高重复性——血浆样本，两次独立实验，相关系数R2达到0.96（图3）
• 简化实验步骤，减少技术误差，避免交叉污染，提高结果可靠性
全面严格的质控系统
  • 溶血判定：实验前用Nanodrop检验样本溶血情况，避免抑制PCR的物质
• 评估RT反应效率：RT反应设置Spike-in
• 监测PCR反应过程：PCR芯片内设阳性对照
• 内参设置：选择血清血浆中稳定高表达的microRNA (miR-423-5P等)为内参，校正数据
• 扩增结果判定：采用SYBR green的PCR方法，可根据溶解曲线判断扩增特异性

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