CRISPR是生物科学领域的颠覆性技术,使用高效、迅速且简单,在生物医学研究领域引起一场巨变,并因此席卷全球实验室。研究人员利用它调整人类基因以消除疾病,创造生命力更加顽强的植物,并且消灭病原体。《Science》2017年度突破、《Nature》2017年度人物均授予了CRISPR相关技术的突破,CRISPR技术再一次成为生命科学的焦点。

       随着近几年的发展,研究者开发出越来越多基于CRISPR的新型基因编辑技术,例如CRISPRa/i,基因定位,表观遗传修饰,单碱基基因编辑系统(BE2,BE3,ABE等),CRISPR/C2c2基因突变检测系统等。CRISPR/Cas9系统的应用更加便捷、高效,也更广泛,目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌的基因组精确修饰,成为科研人员的强大工具。

       为了让更多的科研人员及时全面的掌握CRISPR最新技术,获得基因编辑质粒系统。特于2018年10月15日至16日在北京理工大学国际教育交流中心(海淀区北三环西路66号)举办CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班。在带教教师的指导下,学员独立完成一系列全部实验,免费获得一份CRISPR/Cas9敲除质粒载体(可以用于哺乳动物、植物、真菌、细菌、斑马鱼、线虫等,共55种,见尾页)。

课程安排:

日期 时间 培训内容 授课老师
10月14日 10:00-18:00 培训报到 刘刚博士

       2008年博士毕业于中国科学院上海生命科学研究院,从事肿瘤干细胞,细胞衰老,肿瘤转移等细胞作用网络和通路的研究,并作为骨干研究人员参加了973计划项目、国家自然科学基金重点项目、在香港中文大学做为作为Postdoc和Research fellow,从事研究工作。先后Nature Genetics,cell research、PLOS one等期刊发表论文十余篇。
10月15日 9:00-11:30 理论讲解:
一、基因编辑技术简介
    1.ZFN 2.TALEN 3.CRISPR
二、CRISPR/Cas9基因编辑技术
    1.guide RNA序列设计
    2.靶基因序列查找
    3.sgRNA在线设计、特异性分析和效率验证
    4.不同物种sgRNA设计
实验操作:
一、CRISPR/Cas9基因表达载体克隆构建
    1.sgRNA设计合成
    2.敲除载体选择及线性化
    3.sgRNA连接,转化等
13:00-17:00 理论讲解
一、CRISPR/Cas9转染策略
    1.生物转染 2.物理转染 3.化学转染 4.筛选策略选择
二、脂质体转染,电转,病毒转导,显微注射等)
三、Crispr/Cas9转染策略(植物,动物,原核生物)
四、CRISPR/Cas9病毒系统选择
实验操作:CRISPR/Cas9敲除质粒转染靶细胞
10月16日 9:00-11:30 理论讲解:
一、CRISPR技术应用解析
    1.基因敲除2.基因敲入3.CRISPR在转录调控中的应用4.CRISPR靶基因标记定位5.基因敲除小鼠模型构建策略
二、CRISPR案例解析
    1.基因敲除小鼠模型构建2.植物基因敲除应用3.细菌,真菌等基因敲除应用
三、Cripr基因脱靶分析及解决方案
四、Crispr/Cas9与siRNA、shRNA
实验操作:
    1.CRISPR/Cas9转染后靶DNA检测
    2.靶基因修饰位点扩增及鉴定
13:00-17:00 理论讲解:
一、单碱基基因编辑技术
    1.HF2-BE2 2.BE3系统 3.ABE系统。
二、CRISPR-Cpf1系统介绍
三、CRISPR-C2c2系统介绍
四、多靶点sgRNA载体构建策略
五、Crispr/Cas9系统在肿瘤和遗传病治疗中应用解析
实验操作:
    1.CRISPR基因敲除效果检

举办地点: 
北京理工大学国际教育交流中心(海淀区北三环西路66号) 

参加对象
从事医学、生命科学、农学等领域科研工作者和高校教师及研究生。

授课方式
理论讲授和实际操作紧密结合。每位学员在辅导教师的指导下,独立完成实验操作。

收费标准
注册费: 2800元/人,2018年10月7号之前汇款报名可以优惠至:2600元/人。包括学费、资料费、试剂耗材费、其他材料费;免费提供工作午餐,可协助安排住宿,住宿费用自理。
推荐住宿地点:如家快捷酒店(北京苏州桥人民大学店) 365元/大床,390/标间。
速八酒店苏州桥店 280元/大床、298元/标间。
北京理工大学国际教育交流中心360元/标间。

银行汇款
北京微旋基因技术有限公司
开户行: 中国建设银行北京宣武支行
账  号:11001019500053058529
备  注:银行转账的学员,请于汇款单备注栏内注明参会人姓名

联系我们
联系人:郑老师   
联系方式:18046571207      010-53516075   
E-mail:sales@micro-helix.com

承办单位:                                
北京微旋基因技术有限公司

举办时间:
2018年10月15日至16日

CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班
报名回执表
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如家快捷酒店
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1. 确定参加后,请将报名表发送至sales@micro-helix.com,邮件发出后两日内若无回复,请电话联系确认。
2. 联系人:郑老师  手机:18046571207


CRISPR 质 粒 清 单
Plant #50588 pHSN401 CRISPR/Cas based plant genome editing and gene regulation; expresses 3×FLAG-NLS-zCas9-NLS, gRNA scaffold for insertion of target sequence (AtU6-26 promoter), Hyg resistance
#63142 pRGEB32 (Empty Backbone) Express sgRNA/PTG with rice snoRNA U3 promoter and Cas9 with rice ubiquitin promoter for Agrobacterium-mediated transformation.
#51295 pRGEB31 (Empty Backbone) Binary vector derived from pRGE31. Deliver sgRNA and Cas9 into plant. by agrobacterium mediated transformation.
Insect #49330 pAc-sgRNA-Cas9 Expresses sgRNA and Cas9-Puro in Drosophila S2 cells
C.elegans #47549 pDD162 Cas9 + sgRNA plasmid that can be modified to cleave any Cas9 target site in the C. elegans genome.
Yeast
Bateria
#43804 p415 Human Optimized S. pyogenes Cas9
#42875 pCRISPR A crRNA expression plasmid for targeting a specific sequence
  #84379 pRH2502 Expression of dcas9 D10A H840A from a TetR-regulated uvtetO promoter
#84380 pRH2521 Expression of sgRNA from a imyc promoter (Pimyc)
#61737 pCRISPomyces-2 Streptomyces expression of codon-optimized Cas9 and custom gRNA
#42876 pCas9 Bacterial expression of Cas9 nuclease, tracrRNA and crRNA guide
Zebrafish #47929 pCS2-nCas9n expression of an optimized Cas9 for genome-editing in zebrafish
Mammalian #52970 FokI-dCas9 Expresses Fok1 nuclease domain fused to catalytically inactive Cas9 DNA-binding domain in mammalian cells
#61591 PX601 A single vector AAV-Cas9 system containing Cas9 from Staphylococcus aureus (SaCas9) and its sgRNA.
#42229 PX260 This plasmid separately encodes a human codon-optimized SpCas9, a tracrRNA and customizable crRNA.
#42230 PX330 A human codon-optimized SpCas9 and chimeric guide RNA expression plasmid.
#48138 PX458[GFP] Cas9 from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA
#48139 PX459[Puromycin] Cas9 from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA (V2.0)
#48140 PX461 Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA
#48141 PX462[Cas9n,Puromycin] Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA
#50661 pCW-Cas9[Tet-on,Puromycin] Inducible lentiviral expression of SpCas9
#52963 LentiGuide-puro-Vector Expresses S. pyogenes CRISPR chimeric RNA element with customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter. Lentiviral backbone.
#52962 lentiCas9-Blast Expresses human codon-optimized S. pyogenes Cas9 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. 3rd generation lentiviral backbone.
#69982 pY010 (pcDNA3.1-hAsCpf1) Expresses humanized AsCpf1
#19319 pLJM1-EGFP (Empty Backbone) 3rd gen lentiviral vector for EGFP fusion; PGK driven puromycin
#12259 pMD2.G VSV-G envelope expressing plasmid
#12260 psPAX2 Lentivirus package plasmids
#61427 lenti sgRNA(MS2)_zeo backbone (Empty Backbone) 3rd generation lenti sgRNA cloning backbone with MS2 loops at tetraloop and stemloop 2 and EF1a-zeo resistance marker. Contains BsmBI sites for insertion of spacer sequences.
#61426 lenti MS2-P65-HSF1_Hygro lenti vector encoding the MS2-P65-HSF1 activator helper complex with a 2A Hygro resistance marker (EF1a-MS2-p65-HSF1-2A-Hygro-WPRE)
#61425 lenti dCAS-VP64_Blast 3rd generation lenti vector encoding dCAS9-VP64 with 2A Blast resistance marker (EF1a-NLS-dCas9(N863)-VP64-2A-Blast-WPRE)
#71814 eSpCas9(1.1) Expresses high specificity SpCas9. Px330-like plasmid.
#47327 pET-28b-Cas9-His For in vitro expression and purification of Cas9 protein
#62934 pET-NLS-Cas9-6xHis Expression of NLS-Cas9-6xHis in bacterial cells
86840 pJH373 mamalian expression of AcrIIA2
84750 Lenti-AsCpf1-Blast Expresses human codon-optimized AsCpf1 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. Lentiviral backbone.
84752 Lenti_gRNA-Puro (Empty Backbone) Expresses Cpf1 customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter
79145 pCAG-eCas9-GFP-U6-gRNA All-in-one CRISPR/Cas9 vector with high-fidelity eSpCas9 expression in human pluripotent stem cells
84745 pY30 Expresses huAsCpf1-P2A-puro and crRNA guide
84743 pY094 Expresses huAsCpf1-T2A-GFP and crRNA guide
84741 pY026 Expresses huAsCpf1 and crRNA guide
60958 PX552 pAAV-U6sgRNA(SapI)_hSyn-GFP-KASH-bGH (SpGuide acceptor). AAV plasmid for sgRNA cloning. GFP-KASH fusion facilitates FACS sorting of cells and nuclei.
79152 pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning LshC2c2 locus in pACYC184 with BsaI sites for spacer cloning
79150 pC001 - huLshC2C2-MBP for bacterial expression Expresses human codon-optimized LshC2c2 for purification in E. coli
64324 pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mCherry Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to mCherry via a T2A peptide
64222 pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mcherry-P2A-Ad4E4orf6 Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked via T2A to mCherry linked to the Ad4 E4orf6 gene via P2A
64218 pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP-P2A-Ad4E1B Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked to BFP via T2A linked to Ad4 E1B via P2A
64323 pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to BFP via a T2A peptide
51023 pSLQ1658-dCas9-EGFP Template for NLS-dCas9-NLS-EGFP fusion protein for CRISPR imaging (the recipient vector can be TetON 3G promoter system)
64108 pHAGE-TO-dCas9-3XmCherry Expression of Sp dCas9-3XmCherry in mammalian cells
  60957 PX551 pAAV-pMecp2-SpCas9-spA (AAV-SpCas9). AAV plasmid expressing Cas9 in neurons under control of truncated mecp2 promoter.
  100806 BE4-Gam Expresses BE4-Gam in mammalian cells
  100809 SaBE4-Gam Expresses SaBE4-Gam in mammalian cells
  102917 pCMV-ABE7.8 expresses ABE7.8 in mammalian cells
  102919 pCMV-ABE7.10 expresses ABE7.10 in mammalian cells
  108382 xCas9(3.7)-ABE(7.10) Mammalian expression vector for xCas9(3.7)-ABE

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