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NanoBRET™ 技术是最新型的BRET技术，可实现在活细胞内实时监测蛋白相互作用。
使用NanoBRET技术进行蛋白相互作用研究，通过网页或微信下载NanoBRET分享模板，提供使用心得或数据，即可获得价值200元礼品; 并有机会被邀请成为Promega特约技术讲师，参加Promega举办的网络或者校园技术讲座交流会。 |
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蛋白：蛋白相互作用检测与生物发光共振能量转移 (BRET, bioluminescence resonance energy transfer) 技术：
蛋白相互作用调控绝大部分的生物进程——从信号通路转导中短暂的相互作用到大的多种蛋白复合体组装，是现在研究的热点。
目前蛋白相互作用检测方法分为两类，一类是非细胞学检测，检测结果欠缺在细胞水平的验证而缺乏说服力，因此还需要进行细
胞学检测来进行验证。而生物发光共振能量转移(BRET) 方法与荧光共振能量转移(FRET) 则是极为少数可以在活细胞水平进行蛋
白相互作用检测的方法。BRET 方法与Co-IP，Pull Down 互补。
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FRET 原理：
当两个蛋白分子相互作用，一个蛋白标记的供体荧光基团的荧光发射光光谱与另一个蛋白标记的受体荧光基团的激发光谱相重叠，供
体荧光分子的激发能诱发受体分子发出荧光，随着距离延长，FRET
呈显著减弱。 |
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BRET 原理：
当两个蛋白分子相互作用，一个蛋白融合表达的供体萤光素酶蛋白
( 传统使用Renilla 海肾萤光素酶) 酶学反应产生的的发光信号光谱与另一个蛋白标记的受体荧光基团的激发光谱相重叠，诱发受体分子
发出荧光。
BRET 方法的优点：
无需激发光，背景更低。
避免了自发荧光干扰。 |
无需漂白，细胞损坏更少。
数据窗口更宽。 |
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NanoBRET™ 技术：
NanoBRET™ 分析是大幅度改良的BRET 分析平台，使用NanoLuc. luciferase 作为能量供体和HaloTag. 蛋白标记的NanoBRET™
618 荧光基团作为受体。来自NanoLuc. 供体的明亮的蓝移发光信号耦合到远红移的 HaloTag. 受体上后，光谱叠加更佳、信号更强、且与传统BRET 分析相比背景更低。
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NanoBRET™ 方法与传统BRET 法相比的优势
• 作为供体的专利型NanoLuc® 萤光素酶蛋白光信号更强，与受体
荧光基团的波长配对更理想。
• 克隆更简单：使用先进的Flexi 载体技术进行克隆，更简单省时。
• 线性范围更宽
• 提供商品化预构建载体，可节省自行构建载体的时间，应用更
方便。
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• 预构建载体解决方案
NanoBRET™ 预构建载体是已融合构建已知相互作用的蛋白基因的载体对，无需您自行再构建载体，可直接用于进行转染构建细胞模型，配合检测试剂即可进行药物作用机理及其他相关的机制研究。省时省力，结果更有保证。
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Bromodomain Assays
| Protein Partner A |
Protein Partner B |
| ATAD2 BD |
Histone H3.3 |
| ATAD2 BD |
Histone H4 |
| ATAD2A |
Histone H3.3 |
| ATAD2A |
Histone H4 |
| BAZ2A |
Histone H3.3 |
| BAZ2A |
Histone H4 |
| BAZ2A BD |
Histone H3.3 |
| BAZ2A BD |
Histone H4 |
| BRD2 |
Histone H3.3 |
| BRD2 |
Histone H4 |
| BRD3 |
Histone H3.3 |
| BRD3 |
Histone H4 |
| BRD4 |
Histone H3.3 |
| BRD4 |
Histone H4 |
| BRD4 BD1 |
Histone H3.3 |
| BRD4 BD1 |
Histone H4 |
| BRD7 |
Histone H3.3 |
| BRD7 |
Histone H4 |
| BRD9 |
Histone H3.3 |
| BRD9 |
Histone H4 |
| BRDT |
Histone H3.3 |
| BRDT |
Histone H4 |
| BRPF1 |
Histone H3.3 |
| BRPF1 |
Histone H4 |
| BRPF1 BD |
Histone H3.3 |
| BRPF1 BD |
Histone H4 |
| BRPF2 |
Histone H3.3 |
| BRPF2 |
Histone H4 |
| BRPF3 |
Histone H3.3 |
| BRPF3 |
Histone H4 |
| CBP |
Histone H3.3 |
| CBP |
Histone H4 |
| CBP BD |
Histone H3.3 |
| CBP BD |
Histone H4 |
| CECR2 |
Histone H3.3 |
| CECR2 |
Histone H4 |
| GCN5 |
Histone H3.3 |
| GCN5 |
Histone H4 |
| MLL1 |
Histone H3.3 |
| MLL1 |
Histone H4 |
| P300 |
Histone H3.3 |
| P300 |
Histone H4 |
| PCAF |
Histone H3.3 |
| PCAF |
Histone H4 |
| SMARCA2 |
Histone H3.3 |
| SMARCA2 |
Histone H4 |
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Other Epigenetic Assays
| Protein Partner A |
Protein Partner B |
| EZH2 |
Histone H3.1 |
| EZH2 |
Histone H3.3 |
| EZH2 |
SUZ12 |
| EZH2 |
EED1 |
| EED1 |
Histone H3.1 |
| EED1 |
Histone H3.3 |
| HDAC1 |
HDAC2 |
| SETD1A |
Histone H3.3 |
| L3MBTL3 |
Histone H4 |
| L3MBTL3 MBT Domain |
Histone H4 |
| MLL1 |
Menin |
| TET3 |
Histone H2A |
| TET3 |
Histone H2B |
| TET3 |
Histone H3.3 |
| TET3 |
Histone H4 |
| LSH |
Histone H2A |
| LSH |
Histone H2B |
| LSH |
Histone H3.3 |
| LSH |
Histone H4 |
| OGT |
Histone H2A |
| OGT |
Histone H2B |
| CBX1 |
Histone H3.1 |
| CBX3 |
Histone H3.1 |
| CBX5 |
Histone H3.1 |
Transcriptional Protein Assays
| Protein Partner A |
Protein Partner B |
| P300 |
HIF1alpha |
| P53 |
MDM2 |
| N-terminal p53 |
MDM2 |
| P53 |
PARP1 |
| MED12 |
MED26 |
| MED13 |
MED26 |
| MYC |
MAX |
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Signaling Proteins and Kinase Assays
| Protein Partner A |
Protein Partner B |
| FKBP |
FRB |
| GRB2 |
EGFR |
| MEK |
ERK |
| SKP1 |
SKP2 |
| SKP2 |
CKS1B |
| SKP2 |
p27 |
| ERK |
ELK |
| KRas (G12C) |
cRaf |
Membrane Protein Assays
| Protein Partner A |
Protein Partner B |
| MRAP |
MC2R |
| MRAP |
MRAP (Dimerization) |
| EGFR |
EGFR (Dimerization) |
RNA Binding Protein Assays
| Protein Partner A |
Protein Partner B |
| hnRNPA |
hnRNPF |
| hnRNPA |
hnRNPM |
| hnRNPA |
hnRNPU |
| hnRNPA |
hnRNPH |
| hnRNPF |
hnRNPH |
| hnRNPF |
hnRNPM |
| hnRNPF |
hnRNPU |
| hnRNPH |
hnRNPM |
| hnRNPH |
hnRNPU |
| hnRNPM |
hnRNPU |
| hnRNPF |
Nono |
| hnRNPU |
DDX5 |
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• 自行构建载体解决方案
1. Flexi 技术解决方案- NanoBRET™ PPI Flexi. Starter System
通过 Flexi. 载体克隆系统生成 Nluc 或HaloTag. 的 N- 端融合蛋白 — Flexi. 载体克隆系统生成一种定向克隆技术，基于两个稀有酶切位点的限制性内切酶, SgfI 和PmeI, 这种技术能够快速，高效，高保真性地在不同 Flexi. 载体间转移蛋白编码区，而无需重新测序。NanoBRET™ PPI Flexi. Starter System 提供了以Flexi. 载体系统为基础进行蛋白相互检测的解决方案，包括载体，检测试剂及阳性对照，配合Flexi. System, Entry/Transfer 或Carboxy Flexi. System, Transfer 即可完成实验。
克隆配套产品
2. 多克隆位点解决方案- NanoBRET™ PPI MCS Starter System
带有多克隆位点的NanoLuc® 融合蛋白克隆载体和HaloTag® 融合蛋白载体，检测试剂和阳性对照的试剂盒
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• 应用举例：检测JQ1 抑制剂对细胞中BRD4 蛋白与组蛋白Histone H.3 蛋白的相互作用的影响
检测BET bromodomain 抑制剂-JQ1 对BRD4 和Histone H.3 蛋白相互作用的影响：
• 使用Promega 预构建的BRD4 融合蛋白载体和Histone H.3 融合蛋白载
体，转染HEK293 和HCT116 细胞。
• 以JQ1 处理细胞。
• 孵育后再按顺序加入荧光配基和NanoBRET™ Nano-Glo® Substrate
底物反应。
• 最终检测BRET ratio 信号。
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其他相关文献：
• Demont, E., Bamborough, P., Chung, C., Craggs, P., Fallon, D., Gordon, L., Grandi, P., Hobbs, C., Hussain, J., Jones, E., Le
Gall, A., Michon, A., Mitchell, D., Prinjha, R., Roberts, A., Sheppard, R., & Watson, R. (2014). 1,3-Dimethyl Benzimidazolones
Are Potent, Selective Inhibitors of the BRPF1 Bromodomain。ACS Medicinal Chemistry Letters DOI: 10.1021/ml5002932
• Demont, E.H. et al. (2014) 1, 3-Dimethyl Benzimidazolones Are Potent, Selective Inhibitors of the BRPF1 Bromodomain. ACS
Medicinal Chemistry Letters. September 10 (Epub), DOI: 10.1021/ml5002932
Promega 技术资源：
• 技术资料：可联系Promega 公司或经销商所需资料。具体联系方式见封底。
• 现场技术讲座：可联系Promega 公司预约讲座。具体联系方式见封底。
• 网络技术讲座：请登陆http://cn.promega.com/resources/webinars 观看。
• 技术博客：请登录http://www.promegaconnections.com/ 浏览最新技术文章。
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4. 高效低毒转染-ViaFect 转染试剂
 上图. 以ViaFect™ 转染试剂建立造血细胞的细胞因子信号通路模型。以ViaFect™ 转染试剂或电穿孔将pGL4.32[luc2P /NF-κB-RE/Hygro] Vector ( 一种带有
NF-κB 应答元件的萤光素酶报告基因载体) 瞬时转染
入TF-1 cells。然后以TNFα 刺激细胞6 小时，再以
Bio-Glo™ Luciferase Assay System检测萤光素酶表达。 |
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5. 细胞活力检测试剂---- 一步法快速细胞活力检测
6. GloMax® Discover 多功能检测仪
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• 使用简单
选择预置的Promega 程序或编辑您自己需要的程序。数据可输出至网络，云，
LIMS 或其他服务器。容易实现化学发光，荧光，UV- 可见吸收光，BRET
和 FRET 检测。
• 可实现自动化
可与您的自动化工作流整合实现高通量检测，或者整合进您的LIMS 数据管理
系统。
• 超高灵敏度
动态范围宽，灵敏度高，孔间交叉干扰小，使得您的数据更加可信。
• 手动干扰最小化
自动转换滤片，轻松实现多重检测。
• 节省人力
预置的程序可节省优化程序的时间。
• 直观的软件界面
触摸屏可实现编辑程序，整合自动化平台，输出数据。 |
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