难点：①RNA具有高级结构；②反转录酶的非特异结合；③RNA降解；④引物错配延伸

推荐：Takara PrimeScript系列反转录产品

• PrimeScript Reverse Transcriptase(RTase) 大大降低了cDNA合成的最大阻碍，即反转录酶本身对于RNA的非特异结合，同时提高了反转录引物的特异性。通过以上两个特点与本酶具有的强置换延伸活性，在对RNA损伤很小的42℃条件下，对于结构复杂的RNA及长链的RNA能够合成低背景的cDNA。
• PrimeScript  II RTase是PrimeScript RTase添加辅助蛋白质而形成的改良品，能够很好的抑制cDNA合成的阻害因素。尤其是使用Oligo dT引物的polyA延伸反应，能够得到低背景高质量的全长cDNA产物。

难点：①目的片段太长；②AT或GC含量高，碱基分布不均；③模板成分复杂，含有PCR阻害物；④微量模板或模板量过大易发生非特异扩增

推荐：高成功率的PCR酶 Tks Gflex™ DNA Polymerase （Code No. R060）

难点：①插入位置没有合适的酶切位点；②DNA片段太多或太大，连接酶反应效率低；③克隆准确率低，需要大量反复筛选；④需要做亚克隆，浪费试剂、精力和时间

推荐：高效无缝克隆方法In-Fusion HD Cloning（Code No. 639648）

难点：①转化效率太低，没有菌落；②重组载体太大，菌落少；③菌落生长速度太慢；④实验室制备感受态，费时且效率低

推荐：高效感受态细胞E.coli HST08 Premium Competent Cells （Code No. 9128）