【开场语】
PCR扩增实验是每个做分子生物学相关研究老师的必备技能之一，它的反应体系由PCR酶、引物、dNTP、模板、buffer（Mg2+）组成，被广泛应用于基础研究、疾病诊断、农业检测和法医调查等领域。这其中，PCR酶对PCR反应的成败起到了很大的作用。但传统的Taq DNA聚合酶并不能满足高GC含量、粗提样品、多重PCR、高保真等一些特殊PCR扩增需求。
Takara作为PCR酶的重要企业，一直致力于开发和丰富PCR产品线，包括高成功率的Tks Gflex™、高保真的PrimeSTAR®系列、直接扩增的MightyAmpTM系列、添加染料可直接电泳的Premix PCR试剂、以及基础PCR酶Taq、Ex Taq、LA Taq……
本次PCR酶专访，我们就带您走进Takara科研实验室，深入了解一下Takara多功能PCR酶--Tks Gflex™
【本期嘉宾介绍】
广谱型PCR酶：Tks Gflex™ DNA Polymerase
简介：集结了Takara技术的PCR酶，提高PCR扩增成功率，十拿九稳。采用了Takara特别开发的延伸因子，大大提高了延伸性及反应速度。此外，制品中添加了抗体，适用于Hot Start PCR。
【技术信息】
使用改良α型聚合酶、通过添加改良型延伸因子提高反应性能
通过对α型聚合酶进行改良、抑制了酶自身对于DNA模板的非特异性扩增以及过剩结合。
此外，通过添加改良型延伸因子，使得DNA合成能够连续顺畅的进行，从而提高反应性能。增加延伸性、能够稳定的获得足够长度的扩增产物。
通过背景降低因子的添加大幅提高了反应的特异性
通过【背景降低因子】提高引物特异性结合，从而大幅减少非特异性扩增。
【详细解读】
Tks Gflex™ DNA Polymerase是源于Thermococcus sp.高保真聚合酶的改良型PCR酶，具有α型DNA聚合酶特有的高保真性和优良的扩增性，可以有效抑制非特异性扩增。制品中添加了Takara特别开发的延伸因子和新开发的特异性促进因子，可以对宽广的模板量进行快速、高特异性扩增。对于常规DNA聚合酶难以扩增的高GC含量或高AT含量序列，也可以进行有效扩增。此外，反应缓冲液中含有PCR反应的阻害物吸收成分和扩增增强因子，对粗提样品也可以进行高效PCR扩增。
PCR扩增成功率显著提高！可在大多数情况下适用！
√ 使用其它酶难以扩增的目的基因
采用特别的延伸因子和新成分，使PCR扩增兼具高速性和高特异性！
√ GC rich或AT rich的目的基因
GC或AT含量超过70%的目的基因、碱基分布不均也可以很好地扩增！
√ 宽广范围的模板量
不仅可以检出微量DNA，cDNA模板量多时也可以有效扩增。
√ 粗提样品
反应缓冲液中含有PCR反应的阻害物吸收成分和扩增增强因子，大大提升了PCR扩增效率！
【适用条件】
PCR法扩增DNA。
在以下情况下，推荐使用本制品：
• 富含GC或AT模板的PCR扩增。
• 大于10 kb的长片段PCR扩增。
• 粗提样品的PCR扩增。
• 含大量核酸的cDNA的PCR扩增。
【应用领域】
(1) 常规克隆
以下情况推荐使用Tks Gflex™
√ 想要追求克隆等的准确性，但受GC rich·AT rich或长链合成等难扩增因素的限制，使用高保真PCR酶时很难扩增或非特异性扩增较多导致目的基因扩增量不足时。
√ 使用了抗阻害物质的酶，但得不到全长扩增产物，或非特异性扩增较多。
（2）NGS用途
【实验例分享】
常规的PCR扩增实验例很多，篇幅有限我们就不在这里详细介绍了，感兴趣的老师可以通过点击文末的详情，查看了解更多产品相关实验例。
本次主要为大家分享一下，「多个扩增困难因素存在条件下」的PCR实验例。
【用户体验】
【参考文献】
■ PTB-Associated Splicing Factor (PSF) cDNA克隆用参考文献
Tsukahara T, Haniu H, and Matsuda Y.
PTB -Associated Splicing Factor (PSF) is a PPARγ-Binding Protein and Growth Regulator of Colon Cancer Cells. PLoS One. 2013; 8:e58749.
■ TCRβ链的再合成分析扩增用参考文献
Iguchi T, Aoki K, Ikawa T, Taoka M, Taya C, YoshitaniH, Toma-Hirano M, Koiwai O, Isobe T, Kawamoto H, Masai H, and Miyatake S.
BTB-ZF Protein Znf131 Regulates Cell Growth of Developing and Mature T Cells.
J Immunol. 2015 Aug 1; 195(3): 982-993.
■ 使用粪便纯化的DNA进行16S rRNA细菌菌丛分析时制备NGS文库用参考文献
Murakami S, Goto Y, Ito K, Hayasaka S, Kurihara S, Soga T, Tomita M, and Fukuda S.
The Consumption of Bicarbonate-Rich Mineral Water Improves Glycemic Control.
Evid Based Complement Alternat Med . 2015; 2015: 824395
■ 使用果蝇肠纯化的DNA进行16S rRNA细菌菌丛分析时制备NGS文库用参考文献
Sekihara S, Shibata T, Hyakkendani M, and Kawabata SI.
RNA Interference Directed against the Transglutaminase Gene Triggers Dysbiosisof Gut MicrobioDtrao sino phila. J Biol Chem , 2016; 291(48): 25077-25087
■ 使用藻类粗提液进行PCR，筛选基因编辑株用参考文献
Nomura T, Sakurai T, Osakabe Y, Osakabe K, and Sakakibara H.
Efficient and Heritable Targeted Mutagenesis in Mosses Using the CRISPR/Cas9 System.
Plant Cell Physiol. 2016; 57(12): 2600-2610. doi: 10.1093/pcp/pcw173
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