腺相关病毒（Adeno-associated virus，AAV）载体可用于将基因导入至任意分裂/非分裂细胞中，特别是可以在非分裂细胞中实现基因长时间表达。另外，它免疫原性低，适合作为动物个体基因导入（体内转导）工具。不同动物个体AAV载体的剂量取决于目标动物类型和给药方法。如果研究对象是小鼠等，由于动物个体本身很小，给药剂量受限，因此制备高浓度AAV载体是非常有必要的。

在AAV载体制备和纯化的过程中，都有可能会需要浓缩病毒颗粒或者置换缓冲液。AAVpro Concentrator是一种可以轻松高效地浓缩AAV载体的试剂，可用于多种目的，例如浓缩AAV载体培养上清液（有无血清均可）或者置换AAV载体溶液的缓冲液。

此处敲黑板，划重点！
■ 没有超速离心机没关系，普通离心机即可。
■ 在意操作时间没关系，手动操作时间短。
■ 新手小白也没有关系，简便易用不复杂。
Summary-与超速离心方法相比，AAVpro Concentrator具有非常高的用户友好度：易于操作，手动操作时间更短，使用实验室常规仪器就可以完成。

AAVpro Concentrator使用普通离心机即可轻松有效地浓缩AAV载体。与仅涉及AAV颗粒沉淀的其他浓缩方法相比，AAVpro Concentrator操作过程中包含了过滤和超滤步骤，可以产生更高纯度的AAV载体。而混合-离心的操作流程适用于各种起始量，易于扩展浓缩规模，并且手动操作时间不到一个小时。

图1：AAVpro Concentrator操作概览

图2：从无血清培养上清液中浓缩AAV载体

AAVpro Concentrator可用于从细胞培养液中浓缩任何血清型AAV载体，AAV载体的制备可以使用Takara Bio的任意AAV系统。使用AAVpro Concentrator，将产生携带荧光蛋白质ZsGreen1的AAV1载体细胞培养上清液，从40 ml（1个T225培养瓶量）浓缩至200 μl。 然后，使用AAVpro Titration Kit (for Real Time PCR) Ver.2（Code No. 6233）测定滴度，并确认回收率。经检测，浓缩倍数可达到95倍，回收率大约为∽48%。

图3：评估浓缩后AAV载体的感染性

我们通常通过生物学分析方法来检测所制备的AAV载体的感染性滴度，使用AAV载体感染允许细胞(permissive cell)并测定转基因表达量，确定转导单位（TUs）。使用浓缩前后的AAV1-ZsGreen1载体，感染HT1080细胞来评估感染性滴度。以5,000 vg/细胞和500 vg/细胞的AAV载体感染HT1080细胞，并在3天后通过流式细胞术进行分析。结果证明，使用AAVpro Concentrator浓缩后的AAV载体仍然保持其感染性。以MOIs为5,000或500的浓缩后AAV载体感染靶细胞，其感染效率分别为44.7％或9.2％。

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AAVpro^® Concentrator