CRISPR是生物科学领域的颠覆性技术，使用高效、迅速且简单，在生物医学研究领域引起一场巨变，并因此席卷全球实验室。研究人员利用它改造人类基因以消除疾病，创造生命力更加顽强的植物，并且消灭病原体。《Science》2017年度突破、《Nature》2017年度人物均授予了CRISPR相关技术的突破，CRISPR技术再一次成为生命科学的焦点。

       随着近几年的发展，研究者开发出越来越多基于CRISPR的新型基因编辑技术，例如CRISPRa/i，基因定位，表观遗传修饰，单碱基基因编辑系统（BE2，BE3，ABE等），CRISPR/C2c2基因突变检测系统等。CRISPR/Cas9系统的应用更加便捷、高效，也更广泛，目前该技术成功应用于人类细胞、斑马鱼、小鼠以及细菌等基因组精确修饰，成为科研人员的强大工具，基于CRISPR临床实验已经取得初步成功。

       为了让更多的科研人员及时全面的掌握CRISPR最新技术，并应用的相应的领域研究中。特于2019年9月25日至26日在全季酒店(杭州文三路店)举办CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班。

学员可免费获得一份CRISPR/Cas9敲除质粒载体（可以用于哺乳动物、植物、真菌、细菌、斑马鱼、线虫等，共60种，见尾页）。免费赠送sgRNA离线设计软件（有基因组DNA序列即可设计！学员需自带电脑）。

课程安排：
日期 时间 培训内容 授课老师
9月24日 15:00-19:00 培训报到 刘刚博士

       2008年博士毕业于中国科学院上海生命科学研究院，从事肿瘤干细胞，细胞衰老，肿瘤转移等细胞作用网络和通路的研究，并作为骨干研究人员参加了973计划项目、国家自然科学基金重点项目、在香港中文大学做为作为Postdoc和Research fellow，从事研究工作。先后Nature Genetics，cell research、PLOS one等期刊发表论文十余篇。
9月25日 9:00-11:30 理论讲解：
一、基因编辑技术简介（三代基因编辑工具）
    1.ZFN 2.TALEN 3.CRISPR
二、CRISPR/Cas9基因编辑技术原理
    1.CRISPR/Cas9发现历史
    2.CRISPR/Cas9作用机制解析
    3.CRISPR/Cas9系统改造策略
13:00-17:00 理论讲解：
一、sgRNA在线设计构建实战演练(1.靶基因序列查找2.sgRNA在线设计合成)
    1.生物转染 2.物理转染 3.化学转染 4.筛选策略选择
二、CRISPR/Cas9转染策略:
    1.生物转染（慢病毒、腺相关病毒等）
    2.物理转染 （电转核酸/RNP、显微注射、基因枪）
    3.化学转染 （脂质体、阳离子聚合物）
三、CRISPR/Cas9 sgRNA效率检测，脱靶检测及解决策略
    1.高保真Cas9（espCas9、Hifi-Cas9、Cluster1-Cas9）
9月26日 9:00-11:30 理论讲解：
一、CRISPR技术应用解析
    1.基因敲除（单基因敲除、多基因敲除、大片段删除、多靶点sgRNA载体构建策略）
    2.基因敲入实战演练（gRNA选择、同源臂设计、导入，长片段导入策略/提高基因敲入效率策略，PITCh、HITI）
    3.CRISPR在转录调控中的应用（转录激活、转录抑制系统）
    4.CRISPR靶基因标记定位
二、CRISPR案例解析
    1.基因敲除在小鼠模型构建、植物、细胞、细菌、真菌等中的应用案例解析
    2.基于CRISPR的全基因组基因敲除高通量筛选策略
    3.基于CRISPR的全基因组转录激活/抑制高通量筛选策略
三、CRISPR/Cas9与基因沉默技术（siRNA、shRNA）系统比较。
13:00-17:00 理论讲解：
一、单碱基基因编辑技术简介及在基因治疗中的应用
1.HF2-BE2 2.BE3系统 3.ABE系统4.单碱基基因编辑脱靶克服。
二、基因CRISPR的基因检测系统
    1.CRISPR-Cpf1系统介绍(DETECTR)
    2.CRISPR-C2c2系统介绍(SHERLOCK)
三、CRISPR/Cas9系统在肿瘤和遗传病治疗中应用解析
    1、CRISPR结合免疫检查点抑制剂治疗肿瘤
    2、单基因遗传病治疗（DMD、先天性黑朦、地中海贫血等）
    3、CRISPR治疗HIV-基因编辑婴儿解析

举办地点： 
全季酒店(浙江省杭州市西湖区文三路121号全季酒店杭州文三路店)

参加对象
从事医学、生命科学、农学等领域科研工作者和高校教师及研究生。

授课方式
理论讲授和实际演练紧密结合。

收费标准
注册费： 2800元/人，2019年9月10号之前汇款报名可以优惠至：2600元/人。包括学费、资料费、试剂耗材费、其他材料费；免费提供工作午餐，可协助安排住宿，住宿费用自理。
推荐住宿地点：全季酒店,299元/标间，319元/大床。

银行汇款
北京微旋基因技术有限公司
开户行： 中国建设银行北京宣武支行
账  号：11001019500053058529
备  注：银行转账的学员，请于汇款单备注栏内注明参会人姓名

联系我们
联系人：郑老师 
联系方式：010-53516075
E-mail：sales@micro-helix.com

承办单位：                                
北京微旋基因技术有限公司

举办时间：
2019年9月25日至26日

CRISPR/Cas9基因靶向修饰技术培训班
报名回执表
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职务/职称*  发票抬头* 
单位名称：* 税号*
单位地址：*
发票内容：* 其他（请注明）
是否食宿：* 是
否		 全季酒店,299元/标间
全季酒店,319元/大床。
付款方式* 
备注

1. 确定参加后，请将报名表发送至sales@micro-helix.com，邮件发出后两日内若无回复，请电话联系确认。
2. 联系人：郑老师 电话：010- 53516075


CRISPR 质 粒 清 单
Plant #50588 pHSN401 CRISPR/Cas based plant genome editing and gene regulation; expresses 3×FLAG-NLS-zCas9-NLS, gRNA scaffold for insertion of target sequence (AtU6-26 promoter), Hyg resistance
#63142 pRGEB32 (Empty Backbone) Express sgRNA/PTG with rice snoRNA U3 promoter and Cas9 with rice ubiquitin promoter for Agrobacterium-mediated transformation.
#51295 pRGEB31 (Empty Backbone) Binary vector derived from pRGE31. Deliver sgRNA and Cas9 into plant. by agrobacterium mediated transformation.
Insect #49330 pAc-sgRNA-Cas9 Expresses sgRNA and Cas9-Puro in Drosophila S2 cells
C.elegans #47549 pDD162 Cas9 + sgRNA plasmid that can be modified to cleave any Cas9 target site in the C. elegans genome.
Yeast
Bateria 		#43804 p415 Human Optimized S. pyogenes Cas9
#42875 pCRISPR A crRNA expression plasmid for targeting a specific sequence
  #84379 pRH2502 Expression of dcas9 D10A H840A from a TetR-regulated uvtetO promoter
#84380 pRH2521 Expression of sgRNA from a imyc promoter (Pimyc)
#61737 pCRISPomyces-2 Streptomyces expression of codon-optimized Cas9 and custom gRNA
#42876 pCas9 Bacterial expression of Cas9 nuclease, tracrRNA and crRNA guide
Zebrafish #47929 pCS2-nCas9n expression of an optimized Cas9 for genome-editing in zebrafish
Mammalian #52970 FokI-dCas9 Expresses Fok1 nuclease domain fused to catalytically inactive Cas9 DNA-binding domain in mammalian cells
#61591 PX601 A single vector AAV-Cas9 system containing Cas9 from Staphylococcus aureus (SaCas9) and its sgRNA.
#42229 PX260 This plasmid separately encodes a human codon-optimized SpCas9, a tracrRNA and customizable crRNA.
#42230 PX330 A human codon-optimized SpCas9 and chimeric guide RNA expression plasmid.
#48138 PX458[GFP] Cas9 from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA
#48139 PX459[Puromycin] Cas9 from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA (V2.0)
#48140 PX461 Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-EGFP, and cloning backbone for sgRNA
#48141 PX462[Cas9n,Puromycin] Cas9n (D10A nickase mutant) from S. pyogenes with 2A-Puro, and cloning backbone for sgRNA
#50661 pCW-Cas9[Tet-on,Puromycin] Inducible lentiviral expression of SpCas9
#52963 LentiGuide-puro-Vector Expresses S. pyogenes CRISPR chimeric RNA element with customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter. Lentiviral backbone.
#52962 lentiCas9-Blast Expresses human codon-optimized S. pyogenes Cas9 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. 3rd generation lentiviral backbone.
#69982 pY010 (pcDNA3.1-hAsCpf1) Expresses humanized AsCpf1
#19319 pLJM1-EGFP (Empty Backbone) 3rd gen lentiviral vector for EGFP fusion; PGK driven puromycin
#12259 pMD2.G VSV-G envelope expressing plasmid
#12260 psPAX2 Lentivirus package plasmids
#61427 lenti sgRNA(MS2)_zeo backbone (Empty Backbone) 3rd generation lenti sgRNA cloning backbone with MS2 loops at tetraloop and stemloop 2 and EF1a-zeo resistance marker. Contains BsmBI sites for insertion of spacer sequences.
#61426 lenti MS2-P65-HSF1_Hygro lenti vector encoding the MS2-P65-HSF1 activator helper complex with a 2A Hygro resistance marker (EF1a-MS2-p65-HSF1-2A-Hygro-WPRE)
#61425 lenti dCAS-VP64_Blast 3rd generation lenti vector encoding dCAS9-VP64 with 2A Blast resistance marker (EF1a-NLS-dCas9(N863)-VP64-2A-Blast-WPRE)
#71814 eSpCas9(1.1) Expresses high specificity SpCas9. Px330-like plasmid.
#47327 pET-28b-Cas9-His For in vitro expression and purification of Cas9 protein
#62934 pET-NLS-Cas9-6xHis Expression of NLS-Cas9-6xHis in bacterial cells
86840 pJH373 mamalian expression of AcrIIA2
84750 Lenti-AsCpf1-Blast Expresses human codon-optimized AsCpf1 protein and blasticidin resistance from EFS promoter. Lentiviral backbone.
84752 Lenti_gRNA-Puro (Empty Backbone) Expresses Cpf1 customizable sgRNA from U6 promoter and puromycin resistance from EF-1a promoter
79145 pCAG-eCas9-GFP-U6-gRNA All-in-one CRISPR/Cas9 vector with high-fidelity eSpCas9 expression in human pluripotent stem cells
84745 pY30 Expresses huAsCpf1-P2A-puro and crRNA guide
84743 pY094 Expresses huAsCpf1-T2A-GFP and crRNA guide
84741 pY026 Expresses huAsCpf1 and crRNA guide
60958 PX552 pAAV-U6sgRNA(SapI)_hSyn-GFP-KASH-bGH (SpGuide acceptor). AAV plasmid for sgRNA cloning. GFP-KASH fusion facilitates FACS sorting of cells and nuclei.
79152 pC003 - LshC2C2 locus into pACYC184 for spacer cloning LshC2c2 locus in pACYC184 with BsaI sites for spacer cloning
79150 pC001 - huLshC2C2-MBP for bacterial expression Expresses human codon-optimized LshC2c2 for purification in E. coli
64324 pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mCherry Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to mCherry via a T2A peptide
64222 pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-mcherry-P2A-Ad4E4orf6 Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked via T2A to mCherry linked to the Ad4 E4orf6 gene via P2A
64218 pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP-P2A-Ad4E1B Expression vector for sgRNA and for Expression of Cas9 linked to BFP via T2A linked to Ad4 E1B via P2A
64323 pU6-(BbsI)_CBh-Cas9-T2A-BFP Expression vector for sgRNAs cloned into the BbsI sites and for expression of Cas9 linked to BFP via a T2A peptide
51023 pSLQ1658-dCas9-EGFP Template for NLS-dCas9-NLS-EGFP fusion protein for CRISPR imaging (the recipient vector can be TetON 3G promoter system)
64108 pHAGE-TO-dCas9-3XmCherry Expression of Sp dCas9-3XmCherry in mammalian cells
  60957 PX551 pAAV-pMecp2-SpCas9-spA (AAV-SpCas9). AAV plasmid expressing Cas9 in neurons under control of truncated mecp2 promoter.
  100806 BE4-Gam Expresses BE4-Gam in mammalian cells
  100809 SaBE4-Gam Expresses SaBE4-Gam in mammalian cells
  102917 pCMV-ABE7.8 expresses ABE7.8 in mammalian cells
  102919 pCMV-ABE7.10 expresses ABE7.10 in mammalian cells
  108382 xCas9(3.7)-ABE(7.10) Mammalian expression vector for xCas9(3.7)-ABE

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