吉满生物科技(上海)有限公司是一家专业从事生物科技前沿技术研发的高新技术企业。公司自成立以来,始终将服务前沿科学研究作为公司发展之基石,并在基因递送、基因检测 等方面取得多项专利,拥有成熟完善的基因递送和基因检测技术体系,已累计为11000余名客户提供了优质的服务,获得了客户的认可与肯定。
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报告基因简介
报告基因(reporter gene)是一种编码可易于鉴定的蛋白质或酶的基因,其与目的基因融合后的表达产物可用来标定目的基因的表达调控,广泛应用于基因调控、RNA互作等研究领域。
我们采用双荧光素酶报告基因检测(Dual-Luciferase Reporter Assay)进行报告基因检测相关服务。该系统由萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶组成,将特定的转录调控元件或结合位点序列构建到荧光素酶报告基因载体上,通过检测荧光素酶活性的变化反映待测基因的转录调控情况。
该系统具有具有灵敏度高、动态范围广、应用灵活等特点,转录后无需翻译即具有生物活性;实验中报告基因和对照基因的酶没有种源同源性,萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶对应不同的反应底物,反应中不存在交叉干扰。
报告基因检测服务
双荧光素酶验证miRNA与3'UTR相互作用
在miRNA的研究中经常会涉及到miRNA与基因靶向关系的验证,miRNA通过其种子序列(5'端第2-8个碱基)靶向结合mRNA的3'UTR区,诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或阻遏mRNA的翻译过程。基于以上原理,如图1a,将目的结合位点上的基因3'UTR区(或结下游500bp)插入到荧光素酶报告基因载体luciferase下游,与miRNA mimics共转染目的细胞,加入底物,检测荧光素酶活性的变化。若荧光素酶活性下调,则该miRNA与3'UTR区存在相互作用。
LncRNA作为miRNA的“分子海绵”,通过竞争性相互作用间接促进下游靶基因的表达,故lncRNA与miRNA的靶向结合验证与上述原理相同。
图1 miRNA (a)与3'UTR (b) lncRNA报告基因原理示意图
双荧光素酶验证转录因子 与启动子区调控作用
转录因子是一类参与基因转录调控的重要调节因子。不同转录因子的DNA结合结构域识别不同基因启动子区特定的碱基序列,行使抑制或激活该基因转录的功能。如图2,将目的基因启动子区域序列(通常取转录起始位点TSS上游-2000bp),或对特定位点进行突变,或分段截短,构建到报告基因载体luciferase的上游,然后共转染转录因子过表达质粒,通过荧光素酶活反映启动子活性的变化。
图2 转录因子与启动子调控示意图
启动子SNP活性分析
一些基因的启动子区域存在单核苷酸多态性(SNP) ,我们可运用荧光素酶报告系统分析其相对活性。大致分为以下3类(如图3):
a 可能作为增强子,增强或抑制转录的作用
b 可能形成了某种特异结构,影响基因转录
c 可能通过影响基因的剪切方式,从而影响基因表达
图3 启动子SNP活性分析示意图
信号通路分析
针对信号通路研究,通常将通路下游的响应元件序列构建到报告基因载体中(如图4),在不同上游信号条件下,荧光素酶活性代表了通路的下游响应。
图4 响应元件互作示意图
报告基因质粒、慢病毒
1.常用Luciferase 报告基因质粒
2.常用Luciferase 报告基因 慢病毒
3.常用eGFP 报告基因质粒
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