| 主办单位: |
| 中国科学院遗传与发育生物学研究所 |
| 中国遗传学会 |
| 编辑单位: |
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《遗传学报》 编辑部
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| 主 编: 薛勇彪 |
| 主 任: 张颖 |
编委阵容 |
| 审稿专家 |
| 国内刊号： |
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CN 11-5450/R
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| 国际刊号： |
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ISSN 1673-8527
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| 邮发代号： 2-819
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遗传学报 2004.3 Vol 31, No.3 221-226
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| ZNF268基因启动子区的克隆及功能分析 |
| Cloning and Functional Analysis of the Promoter of ZNF268 Gene |
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| 彭 晓，孙 燕，刘 辉，苟德明，李文鑫① |
| 武汉大学生命科学学院生物技术系，武汉 430072 |
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| Key Words： ZNF268基因；启动子；克隆；转录调控 |
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| PDF全文 |
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Abstract
锌指基因家族是人体中最大的基因家族，它参与细胞分化、胚胎发育，并与许多疾病的发生相关。人类ZNF268基因是一个在人胚肝中特异性表达的C2H2型锌指基因，并可能在人的早期肝脏发育中起重要作用。为了研究ZNF268基因表达调控的分子机制, 以正常人总基因组为模板PCR扩增了ZNF268基因的5′调控区2533 bp片段，并将此片段插入启动子缺失的EGFP（增强型绿色荧光蛋白）载体构建了重组质粒pZNF268-EGFP。用脂质体介导的方法将pZNF268-EGFP转染NIH/3T3、COS7、K562、HeLa 4个细胞系。在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光的表达，发现在每个细胞系中,转染了重组质粒pZNF268-EGFP的细胞均有荧光表达,但其起始表达时间均晚于转染了阳性对照质粒pEGFP-C1的细胞且荧光较弱。这表明ZNF268基因的5′调控区2.5 kb片段是一个有功能的启动子，但该启动子与CMV启动子相比活性较弱。选择易培养的HeLa细胞系用于缺失研究。将一系列5′端－2456 bp至－20 bp缺失、3′端均为+77 bp的缺失片段插入启动子缺失的CAT（氯酶素酰胺转移酶）载体构建了一系列重组质粒。将这些重组质粒转染HeLa细胞系进行缺失分析，并通过共转染pCMV-Sport-β gal质粒校正转染效率。结果表明，ZNF268启动子－2456～－1639 bp区域可能含有正调控元件，－1244～－1013 bp和－525～－156 bp区域可能含有负调控元件，ZNF268启动子激活转录的一个重要区域位于－156～－20 bp。 |
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Abstract
The human ZNF268 gene is a novel C2H2 zinc finger gene restrictively expressed in the liver of human embryo.As an initial study on the regulation of its expression,2.5 kb fragment of the ZNF268 5′-flanking region was cloned from human genome by PCR.This fragment was inserted into pEGFP1 vector and then the recombinant plasmid was transfected into several cell lines by liposomal transfection method.EGFP expression was observed in four cell lines under confocal laser scanning microscope.A series of 5′-deletion fragments from －2456～+77 bp to －20～+77 bp were inserted into pCAT-Basic vector to construct recombinant reporter plasmids，which were then transfected into Hela cells for deletion analysis.Results of deletion analysis revealed that an important region for transcriptional activity lies between －156 and －20 bp. |
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| PDF全文 |
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中国科学院遗传与发育生物学研究所
