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基于C6流式细胞仪平台应用FRET技术在活细胞中研究蛋白质相互作用

孟坤, 何庆瑜, 王通, 卢少华

暨南大学生命科学技术学院 功能蛋白质研究广东省普通高校重点实验室 广州 510632

 
Key Words: 荧光共振能量转移 流式细胞术 活细胞 蛋白质相互作用
 

Abstract

摘要: 荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)显微镜技术被广泛应用于在活细胞中研究蛋白质相互作用。随着流式细胞术(fluorescence activated cell sorting,FACS)的发展与应用,FACS-FRET技术不但可以检测活细胞中蛋白质相互作用,还可以进行定量统计分析。由于流式细胞仪价格昂贵、FRET技术对荧光基团发光光谱的特殊要求等原因,目前为止FACS-FRET技术仅仅被应用到一些特殊的科学研究。为了解决这些问题,构建了一对新的FRET荧光基团EGFP-mCherry,并且在小型流式细胞仪C6上检测了EGFP-mCherry融合蛋白的FRET信号,最后使用已明确有相互作用关系的p53蛋白和MDM2蛋白做验证,证明了所构建的EGFP-mCherry可以作为检测FRET信号的荧光基团。不仅促进了FACS-FRET技术的发展,还为人类疾病治疗的药物作用靶点研究提供了有利的研究手段。


 

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