首页 > 核心刊物 > 中国生物工程杂志 2017.5 Vol 37, No.5 > 过表达miR-155抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

过表达miR-155抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化

刘红霞, 施琼, 周一青, 安利钦, 严树涓, 张汝益, 翁亚光

重庆医科大学检验医学院 临床检验诊断学教育部重点实验室 重庆 400016

 
Key Words:  miR-155 骨形态发生蛋白9 C3H10T1/2 成骨分化 HIF
 

Abstract

摘要: 目的:研究过表达miR-155对BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响。方法:①用重组腺病毒Ad-BMP9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞成骨分化,定量PCR (qPCR)检测miR-155的表达,RT-PCR检测Runx2和ALP的表达。②miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测miR-155的表达,ALP活性和染色检测早期成骨能力。③miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,诱导分化14d茜素红S染色检测晚期成骨能力。④miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,qPCR检测成骨分化相关基因Runx2,OSX,COL1A1,ALP,OCN和OPN的表达。⑤miR-155和BMP9共同处理C3H10T1/2细胞,Western blot检测p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达。⑥qPCR和Western blot分别检测HIF1α和VEGF的mRNA表达水平和蛋白质表达水平。⑦应用荧光素酶报告基因对miR-155的靶基因进行筛选和验证。结果:在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化过程中,过表达miR-155降低ALP活性及染色;减少钙盐沉积;成骨分化相关基因Runx2、OSX、COL1A1、ALP、OCN和OPN表达降低;抑制p-Smad1/5/8、OCN和OPN蛋白水平的表达;HIF1α和VEGF的mRNA和蛋白表达水平减少。在对靶基因的检测中,过表达miR-155可以抑制HIF1α蛋白水平的表达,但对其mRNA水平无明显影响。结论:miR-155过表达减弱BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化,可能是通过抑制Smad/BMP信号通路发挥作用,也有可能是通过抑制靶基因HIF1α的表达来发挥作用。


 

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