首页 > 核心刊物 > 中国生物工程杂志 2017.5 Vol 37, No.5 > 稳定表达GLP-1类似物的CHO细胞株的构建及培养工艺研究

稳定表达GLP-1类似物的CHO细胞株的构建及培养工艺研究

张晶晶1, 刘克东1, 钱凯2, 缪亚娜1, 蔡燕飞1, 李成媛3, 陈蕴1, 金坚1

1. 江南大学药学院 无锡 214122 2. 温州大学 温州 325000 3. 上海药明生物技术有限公司 上海 200131

 
Key Words:  关键词: 胰高血糖素样肽-1 中国仓鼠卵巢细胞 单克隆筛选 大规模培养工艺
 

Abstract

摘要: 胰高血糖素样肽-1(Glucagon like peptide-1,GLP-1)是一种治疗Ⅱ型糖尿病的潜在药物,针对其在体内半衰期短和在酵母中表达的批次间不稳定等问题,课题组前期对其进行改造,成功利用pMH3载体在中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞中表达人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)融合蛋白NGGH[6×His-tag+Ek+2×GLP-1(A2G)+HSA]。现利用新型载体pcDNA3.1,构建含融合蛋白的真核表达质粒pcDNA3.1/NGGH,经电击转染转入CHO细胞中。G418抗性压力筛选后利用一种新型的细胞成像系统高效快速地筛选出高表达单克隆株。表达的目的蛋白经WB (Western blot)验证显示,产物具有GLP-1和HSA的双抗原性。经悬浮驯化稳定后,通过批次筛选得到一株稳定的高表达细胞株,产量为58mg/L。利用5L AP20激流式生物反应器扩大培养重组细胞,对pH和溶氧控制条件进行了优化。结果显示,在pH6.8~7.4,溶氧(dissolved oxygen,DO)两相控制的条件下,蛋白质最终表达量可达148mg/L。


 

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