全基因组扩增试剂盒——QIAGEN REPLI-g Ki
QIAGEN公司推出的REPLI-g Kit可以从少量样本中稳定扩增全基因组DNA。REPLI-g Kit包括分离和扩增DNA的试剂，适用的样本广泛，包括已纯化的基因组DNA、全血、组织培养细胞、显微切割得到的细胞、速冻的组织切片、血浆血清中的细胞、口腔细胞、血斑。 一、REPLI-g Kit的应用： 1. 用来从全血和组织培养细胞中直接分离扩增全基因组DNA 研究人类疾病的时候，我们无法大量采集病人的血液或者仅仅只能获得极少量血样，导致DNA样本量不足，为基因分型和DNA序列分析的研究带来极大不便。REPLI-g Kit可以从0.5ul血液或者0.5ul细胞悬液（大于600个细胞/ul）中扩增得到40ug基因组DNA，使得研究者可以不用再为样本少而发愁。 2. 扩增已经纯化的基因组DNA。 不少研究机构保存了大量年代久远的珍贵DNA样本，而随着时间推移，这些样本出现原因不明的质量下降，无法很好的应用于下游DNA序列分析。使用REPLI-g扩增这些样本，使这些陈旧的DNA样本重获新生。 二、REPLI-g Kit的原理 REPLI-g试剂盒采用的多重置换扩增（MDA）技术,能对基因组DNA进行稳定的扩增。首先随机六碱基引物在多个位点与模板DNA退火，接下来Phi 29 DNA 聚合酶在DNA的多个位点同时起始复制，它沿着DNA模板合成DNA,同时取代模板的互补链。被置换的互补链又成为新的模板来进行扩增，因此最终我们可以获得大量高分子量的DNA。REPLI-g试剂盒中使用独特的Phi 29 DNA聚合酶，该酶对于模板有很强的模板结合能力，能连续扩增100Kb的DNA模板而不从模板上解离。同时这种酶具有3’—5’外切酶活性，可以保证扩增的高保真性。
图-1 MDA原理示意图 |
三、 REPLI-g Kit的特点 1. 扩增产量稳定 REPLI-g试剂盒的反应体系是50ul，每次反应的标准产量是40ug左右，不论加入的模板量多少，产量都是十分稳定的（图2）。因为每次反应的产量基本相同，在反应结束后无需再进行DNA的定量就可以直接进行下游实验，因此非常适合于高通量实验。
图2恒定的产量 2. 扩增产物长度有保障 产物的长度在2Kb-100Kb之间，平均长度大于10Kb，扩增获得的DNA适合用于各种限制性酶分析和长距离PCR反应 图3得到高分子量的基因组DNA ---- 平均长度大于10Kb 3. 无位点扩增误差 与传统的方法相比较，REPLI-G试剂盒不但省时省力，同时，由于它对整个基因组进行的是非常均匀的扩增，所以各个位点的扩增偏差很小，确保了下游实验的准确性
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