也包含x+、y+、z+系列离子，给质谱图的从头解析造成了一定的困难，而修饰后的肽片段的PSD图谱中只出现了y+离子系列，肽片段离子峰的信噪比较高，图谱极为清晰，因此能毫不含糊地从头解析该两个肽片段的氨基酸序列。同同时对模式肽Lys-肽

图1 Arg-肽ADSGEGDFLAEGGGVR在修饰后（A）和修饰（B）的PSD mALDL 质谱图。

进行同样分析，结果相似。
     对于2D-胶上的蛋白质点，我们首先选取标准蛋白质磷酸化酶进行了测定。此蛋白原位酶解后经化学修饰，接头进行PMF和PSD图谱分析。图2显示的是PMF图谱中1562.2666峰的PSD图谱，所有的离子峰全部出齐，可以清晰地读出全部氨基酸序列。

    

图2 从磷酸化酶b的肽段HLQLLYEINQR获得的PSD MALDL质谱图。

     李桂源等在鼻咽癌细胞系HNE1中经过脂质体转染了一个新发现的与鼻咽癌相关的基因NAG4。在对转染后的蛋白质经2D-胶分离后的差异蛋白质点进行鉴定时，我们用上述报道的方法对鉴定结果不明确的点进行了进一步确证。图3（A，B）显示的是其中一个蛋白质点的PMF和PSD图谱，该蛋白质点的PMF数据在数据库中搜寻，结果列于第一位的纤溶酶原（plasminogeN）和列于第二位的腺苷酸激酶（adenylate kinase）的积分（score）在同一个数量级上，因此无法判定究竟哪一种为目的蛋白质。而图3（B）的PSD结果表明其中一个肽的部分序列为QTTPLIEYYR，与列于第二位的腺苷酸激酶中的酶解片段 LQAYHTQTTPLIEYYR完全吻合，因此将其可靠地鉴定为腺苷酸激酶。由PSD鉴定的NAG4基因转染鼻咽癌细胞系HNE1的差异表达蛋白质共有4种下调蛋白质和两种上调蛋白质。样品均由PMF获得不能确定的蛋白质信息后，经PSD测定获得内部序列进行确认。
     综上所述，化学辅助的MALDI-TOF质谱PSD微量蛋白质内部序列测定技术具有快速、简便、高灵敏度、高准确性的特点。衍生后的肽片段在PSD测定时只产生唯一的y+离子系列，有利于蛋白质酶解肽片段序列的从头解析，能为2D-胶上微量蛋白质点的准确鉴定提供强有力的依据，在蛋白质组学的研究中具有广阔的应用前景。

图3 转染NAG4基因的HNE1细胞经双向电泳分离后上调蛋白点2的PMF（A）和PSD（B）MALDI质谱图。