简 介
串联质谱常被用于蛋白测序及详细定性研究。研究者通常优化实验条件使得每个肽只有单一的断裂位点，从而产生两类肽片段。在许多情况下两类肽片段都会带上电荷，使得谱图同时出现N端和C端的肽片段峰，使片段解析复杂化。
本文描述了如何应用N端修饰简化电喷雾片段谱图，使得得到的谱图可以轻松解析并获取所需信息。
原 理
主链氨基氮原子的质子化能降低肽链的键能，使得肽链得以在低能条件下断裂。双质子的胰蛋白酶酶解肽段用于质谱测序很理想，因为第二个质子很容易使主链氨基的氮原子离子化，从而导致肽链断裂。
在N端引入一个带负电的基团可得到双质子化而净电荷为1的肽链，可提高断裂几率。而断裂产生的b-片段离子因为电中性而不被检测，因此可得到单纯的y-片段离子并使谱图解析变得容易。
材料与方法
混合蛋白样品被还原、羧甲基化并用修饰的胰蛋白酶水解。酶解后的肽段用EttanTM
CAFTM
MALDI 测序试剂盒进行化学修饰，通过用磺酸硫氨酯对肽链的修饰提高片段化效率，然后用毛细管LC-MS/MS
（LCQTM DecaXP）进行分析，LC分离采用BiobasicTM C18, 180(m I.D. x 100mm 柱子，流动相为0.1%
的蚁酸水溶液（A）和0.1% 的蚁酸乙腈溶液（B）。采用的流速为 2(l/min。
结 果
胰蛋白酶酶解肽段
纤维蛋白原肽A的MS/MS谱图：
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（ADSGEGDFLAEGGGVR）：
a) 双质子化的未修饰的肽段的MS/MS谱图。
b) 带单电荷的经磺酸硫氨酯修饰的肽段的MS/MS谱图，因为碎片段主要为肽链的C端（y-片段离子），简化了谱图解析。
胰蛋白酶酶解肽段（续）
单电荷的磺酸硫氨酯修饰的胰蛋白酶酶解肽段的MS/MS谱图：
a) ALELFR, b) VEADIAGHGQEVLIR, c)
HGTVVLTALGGILK, d) LCVLHEK。C端带有精氨酸或赖氨酸的肽段经修饰后的断裂情况很好，MS/MS谱图主要为谱图主要为y-片段离子。
带有脯氨酸的胰蛋白酶酶解肽段
单电荷的磺酸硫氨酯修饰的带有脯氨酸的胰蛋白酶酶解肽段的MS/MS谱图：
a) LFTGHPETLEK, b) IPIK。带有脯氨酸的肽段通常在脯氨酸的Ｃ端断裂效率不高。
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