安玛西亚基因园

间。用GenomiPhiTM 全基因扩增试剂盒扩增大量的基因组DNA既简单又不需要培养。扩增产物不需要进一步处理可以直接用于许多下游应用，例如克隆和PCR。我们成功地从Thermoplasma volanium的甘油保藏物中扩增了DNA并且构建了鸟枪法文库，避免了细菌培养。同时还成功地从扩增产物中克隆并表达了一个目的基因，外切酶III。
要构建一种细菌的克隆文库需要分离一定量的高质量基因组DNA。我们证明在16.5小时内可以扩增出所需的材料而不用等几天或几星期的培养。从ATCC购买的甘油保藏物中直接构建了覆盖整个细菌基因组的鸟枪法克隆文库。在进行GenomiPhi扩增之前只需要一步快速裂解和澄清。得到的微克量级DNA被打断并用标准鸟枪法进行克隆。随后从甘油保藏物中直接用TempliPhi试剂盒扩增克隆并在MegaBACE 4000上用DYEnamic ET Terminator方法进行测序。得到的序列与NCBI的T. volcanium数据库序列进行比较，证明构建的文库均匀地覆盖了整个基因组，并且所有序列信息一致。另外，扩增的基因组DNA是非常好的底物，进行基因特异性的PCR反应。利用GenomiPhi 全基因组扩增试剂盒可以快速克隆和表达特定基因。

4. 用扩增DNA作为底物进行多重PCR分析
由GenomiPhi试剂盒扩增得到的DNA可以代替基因组DNA进行许多下游应用。而许多基因组DNA研究首先需要用PCR扩增特异性片段，我们进一步研究了GenomiPhi试剂盒扩增产物作为PCR底物的性能。从粗制样品扩增得到的DNA进行多重PCR分析可能效率较低，尤其是在多重扩增反应中的较大片段。然而，我们证明了通过对GenomiPhi试剂盒扩增产物进行纯化或者加入普通PCR增强剂可以彻底克服这些问题(图3)。
用GenomiPhi试剂盒扩增得到的DNA经过以下处理后进行多重PCR反应可以得到很好的结果：
* 在多重PCR反应中加入Tween 20和 BSA
* 在多重PCR反应中加入更多的酶