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  宝柏(香港)贸易有限公司(简称宝柏-中国Boppard-China)是一家致力于工业化学领域和生命科学领域研究的高新科技企业。公司成立于1998年,历经十余年的高速发展,宝柏-中国已经成为国内一家知名的试剂、耗材、仪器集中供应商,客户群广泛分布于化学生物技术公司、大学、医院、研究所、工厂等。迄今为止,宝柏-中国已拥有香港、北京、上海和广州等分支机构,为全国客户提供全面的产品,一流的质量,快捷的服务。 21世纪是生物学的世纪,生物医疗,大众健康,环境的可持续发展,都与社会的进步息息相关。在这充满机遇充满挑战的时代,宝柏-中国拥有雄厚的技术力量,完善的市场营销,敬业的销售团队,携手全球知名的合作伙伴,力争成为优秀的市场竞争者,为中国生物化学的科研事业贡献自己的一份力量。 宝柏-中国在此郑重承诺:我们会以有竞争力的价格,高质量的产品,完善的售前售后服务,强大的技术支持,一如既往地为新老客户服务,急客户之所急,忧客户之所忧,为中国科研事业的进步与自身企业的发展而努力。 为完善服务不断创新,永不止步!
肽合成近期新发展 [2017-2-28]
  肽合成近期新发展Protein这个词语来自于希腊语,意思是“第一的物质”。肽及蛋白质对于生命来说正正是“第一的物质”。理所当然地,它的合成方法在化学上一直处于十分重要的地位。现在,将与目的序列蛋白质对应的基因导入到大肠杆菌等宿主中重组表达的基因工程技术十分普及,由此可以生产大量的蛋白质。而且近年,不使用大肠杆菌、只使用酶进行蛋白合成的无细胞蛋白质合成研究也有所进展。但是,使用上述的方法只能合成由20种天然氨基酸组成的单纯的蛋白质,而无法合成出如糖蛋白或磷酸化蛋白等有重要作用的蛋白质。另外,不用特殊方法的话...
宝柏•中国诚邀您参加2017模式动物与重大疾病动物模型研究与应用研讨会 [2017-2-27]
  2017模式动物与重大疾病动物模型研究与应用研讨会模式生物,因其自身的代谢系统等系统与人类相似、易于培养和观察等优点,所以临床研究人员选择了模式生物来进行疾病相关研究。2017年3月24日-3月25日由上海生物谷举办的“2017年模式动物与重大疾病动物模型研究与应用研讨会”以模式生物为出发点,从多领域研讨和展示模式动物相关理念与产品,属于动物医学和生命科学的一次盛会。宝柏也将在本次研讨会与客户交流、接触,除现场展出产品外,还会由专业人员现场咨询解答。地址:上海市徐汇区肇嘉浜路500号上海好望角大饭店(岳阳...
α-突触核蛋白聚集检测试剂盒促销活动 [2016-10-21]
  痴呆症是使记忆和辨别能力产生退化丢失的疾病,还没有根本性的治疗。经过多年的科学研究证实,蛋白凝集发生在许多神经变性疾病(包括痴呆症)的大脑退化部分,表明这种聚集的出现与这些疾病的发生和发展密切相关。聚集发生时,正常蛋白形式因特殊原因形成异常结构,并积累在细胞中,每一种疾病有不同的聚集蛋白。在帕金森病/路易体痴呆/多系统萎缩病人脑内,α-突触核蛋白形式结构发生异常。α-突触核蛋白聚集检测试剂盒模仿体内“α-突触核蛋白”的聚集,是可在体外筛选的活性成分。Cosmo α-Synuclein Aggregatio...
Cosmo 可逆热凝胶限时优惠-3D细胞培养 [2016-7-20]
  温敏性水凝胶 Mebiol Gel促销活动【活动编号: MEBIOLGEL_TRIAL】【活动有效期:2016/7/18至2016/12/31】Mebiol Gel,可用于3D细胞培养和其他领域;PNIPAAm-PEG;聚N-异丙基丙烯酰胺和聚乙二醇的嵌段共聚物。 ◆特点 ● 易于操作● 无毒性,生物相容性好● 100%合成,无病原体● 透明度高,利于细胞观察● 性能完善◆应用● 干细胞和多能干细胞培养,增殖和分化● 3D细胞培养● 细胞移植● 器官和组织再生● 药物传递● 非细胞培养应用◆案例1. ...
肥胖、糖尿病、垂体激素、过敏及免疫相关因子免疫检测试剂-Shibayagi [2016-7-7]
  日本 Shibayagi成立于1977年,从事抗体和免疫试剂盒的生产,是日本著名的内分泌研究公司,提供肥胖、糖尿病、垂体激素、过敏及免疫相关因子免疫检测试剂,用于以科学家为基础的研究领域,为客户提供满意和难忘的的服务,在全球业界享有盛誉。Apo B-48为其特有专利产品。和光编号生产商编号产品名称中文名称包装634-01481AKRIN-011T Mouse Insulin ELISA Kit(Ttype)小鼠胰岛素 ELISA试剂盒(T型)96 tests639-23911AKRIN-011RU M...
AteloCell® 细胞培养胶原-限时促销 [2016-4-20]
  AteloCell® 胶原系列促销活动【活动编号:1058】【活动有效期:即日起至2016/7/31】AteloCell系列包含高纯度胶原制成的溶液、海绵和胶原蛋白膜。该系列产品不但适用于日常细胞培养,更可用于再生医学相关的基础研究。其独特的体内转染胶原AteloGene ® ,是目前市面上独一无二的活体转染试剂,机体不会产生免疫反应,且无任何毒副作用。产品编号产品名称包装建议零售价终端活动优惠(75折)KOU-ACB-05SAtelocollagen coated B...
Exosome 外泌体纯化试剂盒-限时特价促销 [2016-4-20]
  Exosome 促销活动【活动编号:EXOSOME】【活动有效期:即日起至2016/7/31】外泌体和其他细胞外囊泡(EVs)属于小细胞膜囊泡,包含蛋白,mRNA,microRNA,DNA和脂类,是由不同细胞分泌,并且在体液包括血液、唾液、尿液、脑脊髓液(CSF)和乳液中稳定存在。这些EVs被当做细胞和细胞沟通的信使,不同疾病的生物标志物。提取外泌体的常规方法有:超滤,使用表面抗原的抗体进行亲和层析,和用多聚物试剂进行沉淀。然而,这些方法在回收效率,纯度和可操作性上不是非常令人满意。 MagC...
卡氏滴定法检测酮类的水分含量 [2016-3-10]
卡氏滴定法检测醛类的水分含量 [2016-3-10]
ENZO Genomics 基因组学产品促销活动 [2016-2-18]
  ENZO Genomics 基因组学产品促销活动创新型核酸标记产品能得到更清晰的实验结果为基因组学分析提供助力Enzo LifeSciences 是研究生命科学的先驱和创新者,针对基因组学的研究和发展,申请了DNA和RNA的化学标记专利。比较基因组杂交(aCGH)试剂盒是我们的分子生物学产 品组合的支柱,能检测DNA拷贝数的变化和染色体异常。aCGH 试剂盒能使我们更好地认识遗传疾病、癌症、和其它的基因组畸变,并且提供了更具体的特征。日常使用的各种各样的分子生物学产品为我们研发aCGH 试剂盒提供很大的帮...
Shibayagi [2017-3-10]
  Shibayagi.jpgLBIS® 抗dsDNA-小鼠ELISA试剂盒

LBIS® Mouse Anti-dsDNA ELISA Kit

 

近年来研究人员多通过使用与人具有同样的自身免疫性疾病的实验动物自然发病和人为使实验动物发症的方式来研究自身免疫性疾病的机制阐明和新型药物开发。自然发病系统代表的MRL/lpr小鼠被应用到很多实验。MRL/lpr小鼠在淋巴结肿瘤发病同时伴随着肾炎、血管炎、关节炎的高几率发病,对包含慢性风湿性关节炎(RA)模型的自身免疫性疾病发病机制的阐明,可作为有效的模型进行研究。MRL/lpr小鼠血清中被检测出自身抗体有IgG型类风湿因子(RF)、IgM型类风湿因子(RF)、抗ssDNA 抗体、抗dsDNA 抗体、抗Sm 抗体。
通过使用该疾病动物血清中自身抗体含量做标准曲线,通过单位转换,可进行测量之间数值的比较。
LBIS®抗dsDNA-小鼠ELISA试剂盒采用了测定小鼠抗dsDNA 抗体浓度的夹心酶联免疫测定法。

此试剂盒仅限研究使用。

 

◆特点

● 全反应时间是4小时20分钟。

测定小鼠血清或者血浆(肝素血浆除外)中的抗dsDNA 抗体浓度。

可测定微量样本(标准操作法是5μL)。

1个试剂盒可做96孔。

标准品是小鼠源。

全部试剂均为液体。

试剂盒的保存和使用期限

试剂盒在2-8℃保存。此保存条件下,有效期(记载在外箱标签)内试剂盒是稳定的。开封的试剂对应保存状态可能会受到影响,请尽早使用。

◆测定原理

本试剂盒是标准品、稀释样本在抗原包被的微孔板中进行孵育处理。孵育2小时后清洗,加入过氧化物酶结合抗小鼠IgG抗体,与捕捉的抗体孵育2小时。清洗后,显色剂(TMB)与孔中残留的过氧化物酶反应。添加酸性溶液可终止反应。反应生成的黄色产物在450nm处(副波长620nm)测定。吸光度与抗小鼠dsDNA 抗体浓度成正比。标准品浓度对应吸光度可制作成标准曲线。通过标准曲线获得未知样本浓度。

◆试剂盒组成

组成

状态

包装

(A)抗原包被96孔板

直接使用

96 wells(8×12)/1 个)

(B)标准抗小鼠dsDNA 抗体溶液(10000mU/ml)※

浓缩液

100μL/瓶

(C)缓冲液

直接使用

60mL/瓶

(D)标记抗体(过氧化物酶结合抗小鼠IgG抗体)

浓缩液

20μL/瓶

(E)显色液(TMB)

直接使用

12 mL/瓶

(F)终止液(1M H2SO4)※注意操作

直接使用

12 mL/瓶

(G)浓缩清洗液(10×)

浓缩液

100 mL/瓶

盖板


1个

操作说明书


1本

※根据批次不同,数值有差异。

 

◆所需必要设备

● 蒸馏水。

标准溶液稀释用试管。

清洗液(稀释用溶液)用玻璃器具。(量筒·瓶)

枪头交换式移液器。(一次性枪头5μL正规的移液枪,以及50-450μL正规的移液枪)

连续分装移液枪。(例Eppendorf 的multipette plus)、可进行100μL连续分装的仪器。

纸巾等吸水性物品。(清洗后去除板上残留液体)

搅拌器。(Vortex类型)

96孔板用振荡器。(约800rpm)

96孔板用清洗机(若有是最好)或者注射瓶。

96孔板酶标仪。(450 ±10 nm 、620nm:600~650nm)

数据分析用软件。(若有是最好)

 

◆试剂盒性能

测定范围

小鼠抗dsDNA 抗体检测范围在15.6-1000mU/mL内。

特异性

本ELISA系统使用的标识抗体对抗小鼠IgG抗体具有特异性。

与小鼠IgM的反应交差性在检测灵敏度以下。

精密度实验

①批次变动(N=30)平均C.V.値是4.2%

②日差可重复性实验(N=30、3天)平均C.V.値是4.7%

产品详情请浏览宝柏官网:
http://www.boppard.cn/product/show/1015.html

产品编号 产品名称 产品规格
631-02699 LBIS® Mouse Anti-dsDNA ELISA Kit
LBIS® 抗dsDNA-小鼠ELISA试剂盒
96tests
in vivo 体外成像试剂 腔肠素h [2017-3-7]
  腔肠素h

in vivo 体外成像试剂

可应用于生物发光共振能量转移(BRET)、钙离子成像、双报告基因分析。

 

◆特点

● 专有技术实现低价格

可批量供应

高品质产品

案例

使用化学发光指示剂「Nano-lantern」令小鼠癌细胞可视化

图片1.jpg 

惊人的发光强度!!

酶标仪检测使用Nano-lantern和腔肠素h后的光谱

图片2.jpg

数据提供:大阪大学产业科学研究所 永井先生

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
035-22991  腔肠素h
  Coelenterazine h
1mg 生物化学用
031-22993 腔肠素h
  Coelenterazine h
10mg 生物化学用
039-22994 腔肠素h
  Coelenterazine h
50mg 生物化学用
035-22996 腔肠素h
  Coelenterazine h
100mg 生物化学用

AkaLumine 近红外发光荧光素类似物 [2017-3-7]
  AkaLumineTM

近红外发光荧光素类似物

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本产品是发光峰值(图1)在670~680nm的荧光素类似物[1][2]。适用于在不易吸收水、血红蛋白的近红外光谱保持发光峰值的生物体深部in vivo成像[3]

 

◆特点

● 近红外发光底物。

发光波长670~680nm。

不易吸收水、血红蛋白。

最适用于in vivo成像。

溶解法:本产品溶于DMSO(16mg/mL),请根据用途稀释后使用。(溶解后请尽快使用。)

 

图1.发光波长

图片2.jpg

测定条件

缓冲液:KPB pH8

原液:20μM

Mg-ATP:80μM

萤光素酶:0.2mg / mL(photinuspyralis)

测量时间:180秒

测量仪器:ATTO-AB-1850

 

图2.近红外光谱图

图片3.jpg

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
017-23691 AkaLumineTM 1mg 生化学用
013-23693 AkaLumineTM 5mg 生化学用

Wako 培养基定制 [2017-3-3]
  培养基定制

新品速递图wako.jpg

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Wako爱知工厂是具有GMP级管理的培养基专用工厂。

结合试剂实业培养的原料供应线,和有效利用化工业部培养的药品原料制造技术,承接抗体药品和疫苗等生物药品制造以及再生医疗用粉末,以及液体培养基等定制。

 

◆Wako和光纯药GMP级管理

● 参考ICH的原药指南(Q7)合理管理和运用培养的制造。

建筑物、储存室中检验制造、分析、清洗方法。

粉末培养基原料使用的是高品质且来源明确的原料。

 

特点

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生产能力·生产环境

粉末设备包括数kg小规模设备、数百kg中度规模设备。构建了从实验规模到商业规模制造的流程。

液体是在GMP级管理的无尘室内制造。

液体培养基、培养基添加剂、buffer等使用焊床及封口机进行无菌充填包装。


粉末培养基

液体培养基

GMP级生产

non- GMP级生产

GMP级生产

生产规模

400~1000kg/B

1~100kg/B

1L~1500L/B

生产环境

10万级、防虫

室内空调、防虫

100~10万级、防虫·细菌

 

◆有效性检查(仅限GMP级生产)

在爱知工厂,与医药品的制造管理以及品质管理相关的有效性检查业务制定运用的是《有效性检查标准书》和《有效性检查实施计划书等制定程序书》。

图片2.jpg《基本有效性检查》

     工艺验证

     清洗检查

● 分析法检查

   ※关于各种有效性检查需要与客户协商确定。

◆定制流程

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◆相关产品

方便的预调材料-粉末培养基/缓冲剂

植物组织培养用培养基
液体培养基/细胞培养试剂
液体培养基
StemSure®人多能性干细胞无血清培养基Δ



AdipoGen小分子与天然产品 [2017-3-1]
  

AdipoGen小分子与天然产品

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1.抗癌和抗炎试剂
2.Gq家族抑制剂
3.神经化学, CD1d配体
4.炎性体与ATPase抑制剂
5.基因表达工具

◆特异性Gq家族抑制剂 独特!

YM-254890

产品编号:AG-CN2-0509

具有膜透性,是有效且具有选择性的Gq家族抑制剂。 通过阻断GTP的GDP交换,抑制Gαq,Gα11和Gα14(IC 50 =0.095μM)的信号转导,阻止G蛋白的活化。Gαq信号传导已被指出可调节棕色/米色脂肪细胞,并且是一种新型治疗肥胖症的方法。类似的有效和选择性Gαq家族抑制剂如FR900359。

LIT: D. Kamato, et al.; Cell. Mol. Life Sci. (Epub ahead of print) (2016) (Review) | K. Klepac, et al.; Nat. Commun. 7, 10895 (2016)

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◆阿尔茨海默症致病物 最新观点!

Fipronil芬普尼

产品编号:AG-CR1-3648

阿尔茨海默诱导剂。强效GABA受体α-4亚基和β-3亚基抑制剂。广谱杀虫剂。

LIT: T. Narahashi, et al.: Pestic. Biochem. Physiol. 97, 149 (2010) | B.L. Pearson, et al.; Nat. Commun. (2015) | E. Portelius, et al.; J. Alzheimers Dis. 54, 1593 (2016)

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◆Ca2+通道激动剂 最新观点!

GV-58

产品编号:AG-MR-C0035

选择性N-和P/Q型Ca2+通道激动剂。导致神经肌肉无力的多种疾病的潜在先导化合物。
LIT: T.B. Tarr, et al.; Ann. N. Y. Acad. Sci. 1275, 85 (2012) | T.B. Tarr, et al.; J. Physiol. 3687, 592 (2014) | A. Tedeschi, et al.; Neuron 92, 419 (2016)

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CD1d配体抗肿瘤佐剂 原始制造商!

α-半乳糖神经酰胺[KRN7000]

产品编号:AG-CN2-0013

强效NKT细胞刺激物。人和小鼠NKT细胞中脂质结合MHC类I样蛋白CD1d的特异性配体。强效抗肿瘤化合物。
LIT: Combination of the toll like receptor agonist and α-Galactosylceramide as an efficient adjuvant for cancer vaccine: F. Gableh, et al.; J. Biomed. Sci. 23, 16 (2016)

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可提供: 

α-半乳糖苷酰胺类似物I(水溶性)

α-半乳糖苷酰胺类似物8

α-甘露糖基神经酰胺

β-甘露糖基神经酰胺

AG-CR1-3608

AG-CR1-3622

AG-CR1-3594

AG-CR1-3621

 

NLRP3与AIM2 炎性体抑制剂 最新观点!

Shikonin紫草醌

产品编号:AG-CN2-0487

抑制NLRP3和AIM2炎性体的活化。作为抑制剂直接指向Caspase-1,阻断PKM2介导的糖酵解,通过调节巨噬细胞中的EIF2AK2磷酸化,促进炎性体的激活。在几种癌细胞中诱导凋亡和RIP1-和RIP3依赖性坏死。
LIT: Z. Fu, et al.; BMC Cancer 13, 580 (2013) | J. Zorman, et al.; PLoS One 11, e0159826 (2016) | M. Xie, et al.; Nat. Commun. 7, 13280 (2016)

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可提供:

MCC950 . sodium salt

格列本脲(USP)

AG-CR1-3615

AG-CR1-3613

强效H+-ATPase抑制剂 原始制造商!

巴佛洛霉素A1(高纯度)

产品编号:BVT-0252

大环内酯抗生素。特异性液泡型H+-ATP酶抑制剂。区分不同类型的ATP酶。内体,溶酶体和液泡酸化的抑制剂。

LIT: T. Yoshimori, et al.; J. Biol. Chem. 266, 17707 (1991)

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可提供: 

刀豆素A(高纯度)

刀豆素B (高纯度)

刀豆素C (高纯度)

巴佛洛霉素 B1

巴佛洛霉素 C1

BVT-0237

BVT-0253

BVT-0254

BVT-0004

BVT-0068

◆基因表达工具

无水四环素盐酸盐

产品编号:CDX-A0197

细菌表达系统中四环素依赖性基因表达的效应子。是四环素阻遏物(TetR)和反向TetR(revTetR)系统中的强效效应子,结合Tet阻抑物比Tet强35倍。
LIT: A. Kamionka, et al.; Nucleic Acids Res. 32, 842 (2004) | M. Resch, et al.; Nucleic Acids Res. 36, 4390 (2008)

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可提供:百日青蜕皮酮

产品编号:AG-CN2-0053

Wako 神经胶质瘤免疫组织化学用抗体 [2017-2-24]
  神经胶质瘤免疫组织化学用抗体

神经胶质瘤(glioma)是由支撑神经细胞的神经胶质细胞产生的肿瘤。

在这次新改进的WHO2016,除了常规的形态诊断外,又添加了分子信息的分类标准。根据最新研究发现,IDH(Isocitrate Dehydrogenase)1/2基因、ATRX基因、TERT promoter突变以及1p/19q共缺失等已经在神经胶质瘤的分子诊断受到关注。

Wako已经备全可识别野生型·突变型IDH1以及IDH2、ATRX、TERT,适用于免疫组化染色、免疫印迹的单克隆抗体。

▶抗ATRX,单克隆抗体(AMab-6)

ATRX(α-Thalassemia/mental retardation syndrome X-linked α地中海贫血/智力低下综合征X连锁)是与转录调控和染色质重建相关的蛋白质。已证实ATR-X综合征发病机制与X染色体的ATRX基因突变相关。

本抗体是识别人ATRX蛋白质的单克隆抗体。研究发现ATRX基因突变会导致ATRX蛋白的表达消失,因此可用免疫组化染色检测该基因突变情况。

◆产品概述

▪ 克隆号:AMab-6

▪ 特异性:ATRX

▪ 免疫动物:小鼠

▪ 同种型:IgG1·κ

▪ 形态:液体/ 含叠氮化钠的PBS

▪ 抗体浓度:约1mg / mL(产品标签)

▪ 适用范围:

   Western Blot免疫印迹(1μg/mL~)           

   Immunohistochemistry免疫组化(1〜5μg/mL~)            

   ELISA(1μg/mL~)

※请根据具体实验探究最适宜使用浓度。

【案例】

少突胶质细胞[A]以及弥漫星形细胞瘤[B]的免疫组织染色成像[抗ATRX,单克隆抗体(AMab-6)

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标本:脑肿瘤患者病变部位石蜡切片

A:Oligodendroglioma, IDH-mutant [WHO grade Ⅱ]

B:Diffuse astrocytoma, IDH-mutant [WHO grade Ⅱ]

切片厚度:4μm

抗原激活条件:pH 9.0溶液中高压灭菌器处理10分钟后,室温保存40分钟。

淬火:3%过氧化氢溶液,10分钟。

封闭:5%脱脂奶粉溶液,30分钟。

一抗:3μg/mL抗ATRX,单克隆抗体(AMab-6)

二抗:HRP标记的抗小鼠IgG(commercial product)

检测:DAB

对比染色:苏木精

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A:Oligodendroglioma(少突胶质细胞), IDH-mutant :

ATRX基因未突变,抗ATRX抗体免疫组织染色呈阳性。

B:Diffuse astrocytoma(弥漫星形细胞瘤), IDH-mutant :

ATRX基因突变,ATRX表达消失。抗ATRX抗体免疫组织染色呈阴性。正常细胞血管内皮细胞核被抗ATRX抗体染色。

数据提供:东北大学大学院医学系研究科 加藤幸成

▶抗TERT,单克隆抗体(TMab-6)

端粒酶是TERT(Telomerase Reverse Transcriptase端粒酶逆转录酶)、RNA模板和调控亚基的复合体。TERT是端粒酶的催化亚基。生殖细胞和组织干细胞中端粒酶活性高,80%~90%的肿瘤细胞中端粒酶活性也很高。

本抗体是可识别端粒酶催化亚基TERT的单克隆抗体。特别适用于免疫组织染色。神经胶质瘤表现之一,是TERT promoter区域的突变导致TERT蛋白抑制表达。这个现象是ATRX基因和相互排斥所致。TERT promoter突变是与IDH基因突变的1p/19q共缺失,在神经胶质瘤比较常见。另外也发现不发生IDH基因突变的神经胶质瘤。

◆产品概述

▪ 克隆号:TMab-6

▪ 特异性:TERT

▪ 免疫动物:小鼠

▪ 同种型:IgM·κ

▪ 形态:液体/ 含叠氮化钠的PBS

▪ 抗体浓度:约1mg / mL(产品标签)

▪ 适用范围:

   Western Blot免疫印迹(1μg/mL~)

   Immunohistochemistry免疫组化(1μg/mL~)

   ELISA(1μg/mL~)

※请根据具体实验探究最适宜使用浓度。

▶抗IDH,单克隆抗体

IDH(异柠檬酸脱氢酶;Isocitrate Dehydrogenase)是异柠檬酸和α-酮戊二酸相互转换的氧化还原酶。人含有:IDH(细胞质型,NADP+依赖性)、IDH2(线粒体型,NADP+依赖性)以及IDH3(线粒体型,NADP+依赖性),共三种类别。

有报道称IDH1以及IDH2基因在胆管癌,急性骨髓性白血病,软骨肉瘤,骨肉瘤和神经胶质瘤等各种癌症中高频率发生突变。

Wako已经备全识别IDH1・IDH2以及野生型·突变型IDH1/2抗体。

▶抗IDH1-R132H,单克隆抗体(HMab-1)[018-24081]

IDH1的突变几乎限定在132位的精氨酸,132位精氨酸被组氨酸置换的R132H突变占80~90%。

本抗体是可特异性识别132位精氨酸被组氨酸置换突变IDH1-R132H的抗体。不能识别野生型以及R132H以外的突变型。

◆产品概述

▪ 克隆号:HMab-1

▪ 特异性:IDH1-R132H

▪ 免疫动物:小鼠

▪ 同种型:IgG1

▪ 形态:液体/ 含叠氮化钠的PBS

▪ 抗体浓度:约1mg / mL(产品标签)

▪ 适用范围:

   Western Blot免疫印迹(5μg/mL)           

   Immunohistochemistry免疫组织化学(5~10μg/mL)            

   ELISA法(1~5μg/mL)

※请根据具体实验探究最适宜使用浓度。

▶抗IDH1-R132H,单克隆抗体(HMab-2)[013-26851]

本抗体与克隆号HMab-1一样可特异性识别IDH1-R132H抗体。不能识别野生型以及R132H以外的突变型。

即使在抗原浓度和抗体使用浓度低的条件下也可使用。

◆产品概述

▪ 克隆号:HMab-2

▪ 特异性:IDH1-R132H

▪ 免疫动物:小鼠

▪ 同种型:IgG1·κ

▪ 形态:液体/ 含叠氮化钠的PBS

▪ 抗体浓度:约1mg / mL(产品标签)

▪ 适用范围:

   Western Blot免疫印迹(1μg/mL~)            

   免疫组织化学(1μg/mL)            

   ELISA(1μg/mL~)

※请根据具体实验探究最适宜使用浓度。

▶抗IDH1-R132S,单克隆抗体(SMab-1)[015-24091]

IDH1突变,132位精氨酸不是被组氨酸,而是被半胱氨酸、丝氨酸、甘氨酸、亮氨酸置换发生突变。

本抗体是可识别132位精氨酸被丝氨酸置换IDH1-R132S的单克隆抗体。

◆产品概述

▪ 克隆号:SMab-1

▪ 特异性:IDH1-R132S

▪ 免疫动物:小鼠

▪ 同种型:IgG1

▪ 形态:液体/ 含叠氮化钠的PBS

▪ 抗体浓度:约1mg / mL(产品标签)

▪ 适用范围:

  Western Blot免疫印迹(为5μg/mL)            

   Immunohistochemistry免疫组织化学(5~10μg/mL)            

   ELISA法(1~5μg/mL)

※请根据具体实验探究最适宜使用浓度。

▶抗IDH1,单克隆抗体(RMab-3)[014-24061]

可识别野生型/突变型IDH1的抗体。可用于各种类型的神经胶质瘤组织切片的免疫组织染色。

◆产品概述

▪ 克隆号:RMab-3

▪ 特异性:野生型和突变IDH1

▪ 免疫动物:小鼠

▪ 同种型:IgG1 

▪ 形态:液体/ 含叠氮化钠的PBS

▪ 抗体浓度:约1mg / mL(产品标签)

▪ 适用范围:

   Western Blot免疫印迹(5μg/mL)

   Immunohistochemistry免疫组织化学(5~10μg/mL)            

   ELISA法(1~5μg/mL)

※请根据具体实验探究最适宜使用浓度。

▶抗IDH1,大鼠单克隆抗体(RcMab-1)[014-26381]

可识别野生型/突变型IDH1的单克隆抗体。不识别IDH2。

应用于大脑切片的免疫组织染色以及脑源样品免疫印迹的阳性对照以及内参抗体。

◆产品概述

▪ 克隆号:RcMab-1

▪ 特异性:野生型和突变IDH1

▪ 免疫动物:大鼠

▪ 同种型:IgG2a 

▪ 形态:液体/ 含叠氮化钠的PBS

▪ 抗体浓度:约1mg / mL(产品标签)

▪ 适用范围:

   Western Blot免疫印迹(0.5~1μg/mL)            

   Immunohistochemistry免疫组化(1~5μg/mL)            

   Immunocytochemistry免疫细胞化学(1~5μg/mL)

※请根据具体实验探究最适宜使用浓度。

▶抗IDH2,单克隆抗体(RMab-22)[011-24071]

可识别野生型/变异型IDH2的单克隆抗体。

突变型IDH2为172位精氨酸被赖氨酸、蛋氨酸、甘氨酸以及色氨酸置换突变产生。

本抗体可识别野生型IDH2以及突变型IDH2的IDH2-R172K/M。不识别IDH2-R172W。

◆产品概述

▪ 克隆号:RMab-22

▪ 特异性:野生型IDH2和突变IDH2(IDH2-R172K/ R172M)

▪ 免疫动物:小鼠

▪ 同种型:IgG2b

▪ 造型:液体/ 含叠氮化钠的PBS

▪ 抗体浓度:约1mg / mL(产品标签)

▪ 适用范围:

   Western BlotWestern印迹(5μg/mL)           

   Immunohistochemistry免疫组织化学(5~10μg/mL)           

   ELISA法(1~5μg/mL)

※请根据具体实验探究最适宜使用浓度。

▶抗突变型IDH1/ 2,单克隆抗体(MsMab-1)[015-25691]

可识别突变型IDH1以及突变型IDH2的抗体。不识别野生型IDH1/2。

可识别突变型IDH1:IDH1-R132H/R132S/R132G 突变型IDH2:IDH2-R172M/R172S/R172G。

◆产品概述

▪ 克隆号:MsMab-1

▪ 特异性:突变型IDH1(IDH1-R132H/ R132S/ R132G)和突变型IDH2(IDH2-R172M/ R172S/ R172G)

▪ 免疫动物:小鼠

▪ 同种型:IgG2a·κ

▪ 造型:液体/ 含叠氮化钠的PBS

▪ 抗体浓度:约1mg / mL(产品标签)

▪ 适用范围:

   Western Blot免疫印迹(1μg/mL)            

   Immunohistochemistry免疫组织化学(5μg/mL)

   ELISA(1μg/mL)

※请根据具体实验探究最适宜使用浓度。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
017-26751  Anti ATRX, Monoclonal Antibody
抗ATRX,单克隆抗体
100μg  免疫化学用 
010-26861  Anti TERT, Monoclonal Antibody 
抗TERT,单克隆抗体 
100μg 免疫化学用 
018-24081  Anti IDH1-R132H, Monoclonal Antibody 
抗IDH1-R132H,单克隆抗体
100μg 免疫化学用 
013-26851  Anti IDH1-R132H, Monoclonal Antibody 
抗IDH1-R132H,单克隆抗体 
100μg 免疫化学用 
015-24091  Anti IDH1-R132S, Monoclonal Antibody 
抗IDH1-R132S,单克隆抗体 
100μg 免疫化学用 
014-24061  Anti IDH1, Monoclonal Antibody 
抗IDH1,单克隆抗体 
100μg 免疫化学用 
014-26381  Anti IDH1, Rat Monoclonal Antibody 
抗IDH1,大鼠单克隆抗体 
100μg 免疫化学用 
011-24071  Anti IDH2, Monoclonal Antibody 
抗IDH2,单克隆抗体 
100μg 免疫化学用 
015-25691  Anti Mutated IDH1/2, Monoclonal Antibody 
抗突变IDH1 / 2,单克隆抗体 
100μg 免疫化学用 

(编号10020)M65® ELISA试剂盒 [2017-2-23]
  

细胞死亡M65® ELISA试剂盒

M65® ELISA

◆原理

 

M65® ELISA检测来自死亡细胞释放的可溶性角蛋白18(K18),可以整体评估细胞的死亡情况,判断是由于细胞凋亡还是细胞坏死引起的细胞死亡。M65® ELISA 最初是为了和M30 Apoptosense® ELISA配套使用而设计研发的,后者特异性检测细胞凋亡。两者配套使用,可定量检测总的细胞死亡、细胞凋亡和细胞坏死。

由于M30 Apoptosense® ELISA 和M65® ELISA 都是用同一标准进行校对的,所以可以评估细胞死亡中细胞凋亡占的比例。

M65® ELISA可用于检测人血清,并且带有CE标记(可用于体外诊断)

M65-ELISA.jpg

M65.jpg

 

 

 

◆优点・特色

 

只特异性定量检测上皮细胞整体的死亡情况

与M30 Apoptosense® ELISA 配套使用,定量检测细胞凋亡、细胞坏死和细胞死亡。

检测更稳定,特异性更高。

夹心法ELISA检测,可拆卸的96孔板。试剂即开即用

肝脏疾病:检测肝脏疾病患者肝细胞总的死亡情况。可用肝脏疾病检测。

肿瘤:监测上皮细胞肿瘤经化疗后肿瘤细胞的死亡情况。

毒理学:临床评估不同药物对肝脏细胞的毒性。

 

 

◆案例・应用

 

体内细胞凋亡或者坏死引起肿瘤细胞死亡。细胞死亡的模式取决于细胞毒素刺激的类型和肿瘤的类型。细胞内ATP产生缺失通常会引起细胞凋亡,但有时候也会导致细胞坏死 (Leist et al., 1997)。细胞坏死期间,未经caspase水解的细胞内蛋白将会释放到细胞外。

角蛋白18(K18)是由很多种上皮细胞高表达的细胞内蛋白。大多数K18分子在细胞内是非可溶性的,但也报道有可溶性K18池(Chou et al., 1993)。细胞死亡期间,细胞内K18会释放到细胞外。检测细胞外可溶性的K18可反映上皮细胞的死亡情况 “过程和原因” (由于细胞凋亡和细胞坏死导致) (Kramer et al., 2004).

K18 在细胞凋亡期间被caspase催化发生水解, caspase-cleaved片段释放到细胞外。因此细胞外的 caspase-cleaved K18 (ccK18)浓度反映了细胞凋亡的数量。而且M30:M65 比代表了总细胞死亡中细胞凋亡的比例(不同 “M30:M65 比”) (Kramer et al., 2004).

M65 EpiDeath® ELISA 使用两种IgG型的K18小鼠单抗,评估人血清或则血浆中上皮细胞死亡情况。M30 Apoptosense® ELISA 特异性检测在caspase-cleavage d K18 在Asp396形成的新表位 (K18Asp396-NE 或者M30 neo-epitope) ,反映上皮细胞的凋亡情况(Hägg et al. 2002Bivén et al. 2003)。 两种检测试剂盒的单位根据同一标准校对,可以计算caspase-cleaved 和总K18 (“M30:M65 比例”)。培养细胞诱导细胞凋亡导致caspase-cleaved K18释放,M30:M65 比值较高, 然而如果细胞发生死亡,只有K18的水平是升高的,所以M30:M65 比值较低。

 

产品信息

M65®ELISA kit (CE-Mark) 体内,体外实验中,定量检测总的细胞死亡(凋亡和坏死) 。

特异性

样品类型

含有从死亡细胞中释放的CK18的血清或者血浆(EDTA,citrate,heparin plasma)

灵敏度

11 U/I, Standard A(0 U/L)+2 S.D.

范围

125-2,000 U/L

检测目标物

完整的CK18和可溶性caspase酶解的CK18(ccCK18/CK18F/CK18Asp396-NE/M30)

M65 EpiDeath® ELISA 和 M65® ELISA的区别,请参考相关资料。

 

 更多运用案例

产品编号 产品名称 产品规格
10020 M65 ®  ELISA
细胞死亡M65 ®  ELISA试剂盒
96 wells


(编号10040)M65 EpiDeath® ELISA 试剂盒(PEVIVA) [2017-2-23]
  

细胞死亡M65 EpiDeath® ELISA试剂盒Peviva.jpg

M65 EpiDeath® ELISA

 

◆原理

 

      M65 EpiDeath® ELISA检测新一代生物标记物角蛋白18。

      M65 EpiDeath® ELISA 检测新一代的生物标记物角蛋白18。M65 EpiDeath® ELISA检测细胞培养上清,血清和血浆样品中可溶性的角蛋白18。 K18 的含量反应了所有上皮细胞的死亡情况,不管是由于凋亡还是坏死引起的死亡都可以检测到。

M65-EpiDeath-ELISA.jpg

schema-antikroppar-bara-m65_epideath.jpg

 

 

◆优点特色

●    只特异性定量检测上皮细胞整体的死亡情况

●    检测更稳定,特异性更高。

●    夹心法ELISA检测,可拆卸的96孔板。试剂即开即用

●    肝脏疾病:检测肝脏疾病患者肝细胞总的死亡情况。可用肝脏疾病检测。

●    肿瘤:监测上皮细胞肿瘤经化疗后肿瘤细胞的死亡情况。

●    毒理学:临床评估不同药物对肝脏细胞的毒性。

 

细胞凋亡或者坏死引起细胞死亡。细胞死亡的模式取决于刺激的类型 (比如:细胞毒素和化疗后的肿瘤,或者肝脏损伤)和组织类型(比如:肿瘤)。M30 Apoptosense ELISA and 和M65 EpiDeath ELISA配套使用不仅定量检测细胞死亡的数量,而且确定细胞死亡的模式。(凋亡或者坏死)(样品包括血清,血浆和细胞培养上清)

肿瘤中使用的细胞毒素会尽量克服细胞凋亡过程中的紊乱状态,刺激细胞发生凋亡。不同的肿瘤细胞和细胞毒素也会引起细胞坏死。细胞内ATP产生缺失通常会引起细胞凋亡,但有时候也会导致细胞坏死(Leist et al., 1997).

肝脏损伤可能会引起肝细胞的死亡– 凋亡和坏死均可导致。有报道称细胞死亡模式的确定可用于不同肝脏疾病的临床诊断,预判和评估治疗效果(Volkmann et al., 2006)。角蛋白18(K18)是由很多种上皮细胞高表达的细胞内蛋白。大多数K18分子在细胞内是非可溶性的,但也报道有可溶性K18池(Chou et al., 1993)。细胞死亡期间,细胞内K18会释放到细胞外。检测细胞外可溶性的K18可反映上皮细胞的死亡情况 “过程和原因” (由细胞凋亡和细胞坏死引起) (Kramer et al., 2004)。K18在细胞凋亡期间被caspase催化发生水解, caspase-cleaved片段释放到细胞外。因此细胞外的caspase-cleaved K18 (ccK18)浓度反映了细胞凋亡的数量。而且M30:M65 比代表了总细胞死亡中细胞凋亡的比例(Kramer et al., 2004).

M65 EpiDeath® ELISA 使用两种IgG型的K18小鼠单抗,评估人血清或则血浆中上皮细胞死亡情况。M30 Apoptosense® ELISA 特异性检测在caspase-cleavage d K18 在Asp396形成的新表位 (K18Asp396-NE 或者M30 neo-epitope) ,反映上皮细胞的凋亡情况(Hägg et al. 2002Bivén et al. 2003)。两种检测试剂盒的单位根据统一标准校对过,可以计算caspase-cleaved 和总K18 (“M30:M65 比例”)。培养细胞诱导细胞凋亡导致caspase-cleaved K18释放,M30:M65 比值较高, 然而如果细胞发生死亡,只有K18的水平是升高的,所以M30:M65 比值较低。

M65 EpiDeath® ELISA 和 M65® ELISA的区别,请参考相关资料。

M65 EpiDeath®ELISA 是 M65®ELISA 的升级版,用于患者血清/ 血浆或细胞培养样品中总CK18 的测定。

特异性

样品类型

人血清或血浆、人细胞系的培养上清液或裂解液

灵敏度

25 U/L

范围

0–5,000 U/L

检测目标物

可溶性CK18

特点

可进行定量检测;试剂盒包含两个阳性对照;预铺ELISA   板,即用试剂,操作方便;可用于自动化

稀释线性

用M65 EpiDeath StandardA   稀释,平均值是95%(范围88-101%);用血清稀释,平均值是93%(范围82-101%)

更多运用案例

产品编号 产品名称 产品规格
10040 M65 EpiDeath ®  ELISA
细胞死亡M65 EpiDeath ®  ELISA试剂盒
96 wells
(编号10011)M30 Apoptosense® ELISA(细胞凋亡检测试剂盒) [2017-2-23]
  

细胞凋亡M30 Apoptosense®ELISA试剂盒
M30 Apoptosense® ELISA

 

◆原理
 
M30 Apoptosense® ELISA是PEVIVA最畅销的产品。可用于定量检测表达角蛋白18(K18)细胞(人)的凋亡情况。检测结果可信度高,检测结果重复性好。特异性检测可信度高是因为M30 Apoptosense® ELISA 只单独检测可溶性caspase-cleaved 角蛋白18(细胞凋亡产物)。
该产品广泛运用于肝脏疾病,肿瘤,毒理学等研究领域。
M30 Apoptosense® ELISA可用于检测人血清,并且带有CE标记(可用于体外诊断)。所有试剂都是即用型的。
◆优点特色
 
特异性定量检测表达角蛋白18细胞的细胞凋亡,包括肝细胞,乳腺癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌等上皮细胞来源的肿瘤细胞。
可用于早期凋亡研究,比常规的Annexin V检测灵敏度高。可检测血清、血浆和细胞培养上清的样品。常规检测细胞凋亡,需要制备细胞裂解液,取材不方便。
可检测多种caspase介导的细胞凋亡(比如caspase-3,-7,-9)
夹心ELISA法进行检测,96孔板,板子可拆卸。试剂即拆即用。
与M65® ELISA 配套使用,定量检测细胞凋亡、细胞坏死和总细胞死亡。
肝脏疾病:定量检测患肝脏疾病病人的肝细胞凋亡情况,可预测患肝脏疾病的可能性。
肿瘤:监测上皮细胞肿瘤患者化疗诱导肿瘤细胞凋亡的情况。
毒理学:临床评估不同药物对肝脏细胞的毒性。
 

 
 
 
M30 Apoptosense® 是基于M30单抗的ELISA试剂盒 (Leers et al., 1999).。 该抗体可以特异性结合caspase-cleaved 角蛋白18 (ccK18, caspase-celaved cytokeratin 18, ccCK18 或者K18-Asp396。caspase水解角蛋白18形成3个片段,其中1个片段 氨基酸第387位-第396位含有新表位(neoeptitope) ,这个片段就称为caspase-cleaved角蛋白),但是不结合天然、未切除的K18。 M30 Apoptosense® 因此可特异性检测上皮细胞的凋亡情况 (Hägg et al. 2002).
 
 
◆案例应用
 
监测肿瘤治疗
 
人 经常患的肿瘤包括肺癌,乳腺癌,前列腺癌和结肠癌。这些肿瘤细胞起源于上皮细胞,并且表达K18。肿瘤治疗过程中肿瘤细胞发生凋亡,K18被水解后释放到 细胞外和血液中。.相比较而言,其他类型细胞比如淋巴细胞化疗后细胞发生凋亡不会产生K18片段。 Caspase-cleaved CK18 因此成为理想的血液型细胞凋亡标记物。进来研究发现接受不同治疗方案的肿瘤患者,其血清中的caspase-cleaved K18 (ccK18, K18Asp396-NE 或者 M30新表位)有所提高 (Kramer et al., 2004Kramer et al., 2006)。这个提升与临床治疗有关。 (Olofsson et al., 2007Scott et al., 2009Hou et al., 2009).
 
 
肝脏疾病
 
肝细胞表达K18。在涉及细胞凋亡的肝脏疾病比如肝纤维化、肝脏损伤中K18发生水解,导致组织中M30表位暴露 (et al. 2001 Bantel)。患有肝细胞凋亡相关的疾病包括丙肝病毒感染(et al., 2004 Bantel),乙肝病毒感染(Papatheodoridis et al., 2008),非酒精的脂肪肝(NASH)(et al. 2006 Wieckowska),毒剂相关脂肪肝(NASH)(Cave et al., 2010),胆道炎症和严重胆汁郁结 (Yagmur et al., 2007)的患者,其血液循环中可溶性caspase-cleaved K18-Asp396片段升高。 
 
 
其他运用
 
由细胞凋亡引起细胞死亡的其他疾病。检测caspase-cleaved K18 片段证实可用于严重白血病患者的早期预测(et al., 2009 Hofer).
 M30 Apoptosense® ELISA 可用于监测器官移植的病人(et al., 2007 Luft) ,也可用于肝脏移植期间caspase抑制剂的临床实验 (et al., 2007 Baskin‑Bey).
产品信息
M30-Apoptosense®ELISA kit (CE-Mark)       
在体内外实验中定量检测上皮细胞的凋亡。使用血浆样品,可以特异性定量检测小鼠模型中人的异种移植物的凋亡情况。

特异性
样品类型 含有从凋亡上皮细胞中释放的CK18的血清或者血浆(EDTA,citrate,heparin   plasma);含有CK18阳性的凋亡细胞或者组织的细胞裂解液或者上清
灵敏度 25U/L, Standard A (0U/L)+ 2 S.D.
范围 75-1,000 U/L
检测目标物 可溶性caspase酶解的CK18
 

更多运用案例
 
 

产品编号 产品名称 产品规格
10011 M30 Apoptosense ®  ELISA
细胞凋亡M30 Apoptosense ® ELISA试剂盒
96 wells


SuperSep Phos-tag™ 预制胶(蛋白磷酸化研究) [2017-2-21]
  

蛋白磷酸化研究的预制胶新品速递图wako.jpg

SuperSep Phos-tag™

SuperSep Phos-tag™是研究蛋白磷酸化的方法,无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。

SuperSep Phos-tag™


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Phos-tag™是一种预制胶,预先加入了50 μmol/L的Phostag™ Acrylamide,打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子,在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好,得到的带条结果也很整齐。

磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白作为不同条带分离。

分离后,胶可用于考马斯亮蓝染色,免疫印迹和质谱实验。

Phos-tag™ SDS-PAGE 的原理

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在HighWire Search 上搜索到的论文数

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运用

利用p35的丙氨酸突变体确定Cdk5 激活p35的磷酸化位点

p35常见的磷酸化位点是Ser8和Thr138。但是Ser8和Thr138位点往往会发生丙氨酸突变,产生3种突变体(Ser8突变体:S8A,Thr138突变体:T138A,Ser8和Thr138双突变体:2A)。这3种突变体、野生型p35、Cdk5和没有激酶活性的Cdk5都来源于COS-7细胞。这些细胞裂解液用Phos-tag™ SDS-PAGE和Western blotting 进行检测(检测抗体:p35抗体)。

blob.png

100 μM Phos-tag ™ 丙烯酰胺, 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶

可明确磷酸化位点和条带迁移率的关系!

- 泳道1(条带L2和L4)和泳道5(条带M1):p35在Cdk5的作用下发生了磷酸化;

- 泳道1(条带L2和L4)和泳道3(条带L2和L4):在无激酶活性Cdk5的作用下,大约有一半p35蛋白在Thr138位点

发生磷酸化,同样在138位发生突变的p35蛋白亦是如此。

泳道5 (条带M1)和泳道6(条带L3和L4):Ser8和Thr138是主要的磷酸化位点;

- 泳道5(条带M1)、泳道7(条带L1和L2)和泳道8(条带M2):条带M1是Ser8和Thr138都发生磷酸化的条带;

条带M2是只有Ser8磷酸化的条带;条带L1和L2是只有Thr138磷酸化的条带。

※ 条带L1和L3中的X 是不确定哪个位点发生磷酸化的条带;

※ 条带L4是非磷酸化的p35。

【参考文献】

▪ Quantitative Measurement of in Vivo Phosphorylation States of Cdk5 Activator p35 by Phos-tag ™ SDS-PAGE. T. Hosokawa, T. Saito, A. Asada, K. Fukunaga, and S. Hisanaga,Mol. Cell. Proteomics, Jun 2010;9: 1133 - 1143.

【结果提供】

理化学研究所 脑科学综合研究中心 回路功能研究核心 记忆功能研究团队 细川智永(Dr. T. Hosokawa)

首都大学东京 理工学研究科 生命科学专业 神经分子功能研究室 久永真市(Dr. S. Hisanaga)

检测含有Dnmt1磷酸化激酶的片段

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我们可以确定在片段中含有目的激酶!

① 采用亲和色谱法从鼠脑提取液中纯化GST-Dnmt1(1-290)结合蛋白

② 使用0.3 M 和1 M NaCl 的DNA 纤维素柱洗脱得到目的蛋白

③ GST-Dnmt1(1-290)作为体外激酶实验的反应底物

④ Phos-tag ™ SDS-PAGE 用于Western blotting,确定迁移条带中每个片段的激酶活性

【参考文献】

▪ The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/epsilon. Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita, Biochem. J.,

【结果提供】

高知大学 综合研究中心 生命、功能物质部门 实验实习机器设施 杉山康宪(Dr. Y. Sugiyama)

香川大学 农学部 应用生物科学科 动物功能生化学研究室 龟下勇(Dr. I. Kameshita)

二维电泳中的应用:分析hnRNP K磷酸化异构体

小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后,裂解细胞,经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中,一维是IPG 胶,二维是Phos-tag ™ SDS-PAGE,可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪,可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。

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同一个等电点的位置上,不同位点发生磷酸化都可以被区分开来

(例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7)

【参考文献】

▪ Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics, Nov 2010; 10(21): 3884-95.

【结果提供】

横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生(Dr. Y. Kimura)、平野久(Dr. H. Hirano)

理化学研究所RCAI 小原收

备注

样品制备:

Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感,尤其是螯合剂,钒酸,无机盐,表面活性剂这类物质。

强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。

转膜前处理:

另一个必须的步骤是在转膜前,用EDTA去除凝胶中的金属离子(Mn2+或者Zn2+);

该步骤可提高蛋白的转膜效率。

● 分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。

● 将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer,至少20分钟,温和摇晃。更换新缓冲液,重复3次。

● 将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer,10分钟,温和摇晃。

● 转膜操作*。

* 建议用湿法转膜,以提高转膜效率。

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质量控制

每一批SuperSep Phos-tag™,出厂前均根据其产品规格进行测试,以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白,以及他们的分离成都在正常参数内。

◆产品信息

用于Bio-Rad伯乐电泳仪

货号

品名

电泳仪

规格

198-17981

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well,

83×100×3.9mm

Mini-PROTEAN® 

Tetra Cell

(Bio-Rad Laboratories, Inc.)

5 块

195-17991

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well,

83×100×3.9mm

5 块

用于Life Technologies电泳仪

货号

品名

电泳仪

规格

192-18001

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well,

100×100×6.6mm

XCell SureLock® 

Mini-Cell

(Life Technologies, Inc.)

5 块

199-18011

SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well,

100×100×6.6mm

5 块

产品编号

产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™  (50 μmol/L), 10%, 13 well 
Phos-tag 13孔10%预制胶
5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well 
Phos-tag 17孔10%预制胶
5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well 
Phos-tag 13孔12.5%预制胶
5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well 
Phos-tag 17孔12.5%预制胶
5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well 
Phos-tag 13孔15%预制胶
5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well 
Phos-tag 17孔15%预制胶
5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well 
Phos-tag 13孔17.5%预制胶
5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well 
Phos-tag 17孔17.5%预制胶
5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm 
Phos-tag™ 预制胶,BioRad型
5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm 
Phos-tag™ 预制胶,BioRad型
5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm 
Phos-tag™ 预制胶,Life Technologies型
5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm 
Phos-tag™ 预制胶,Life Technologies型
5块




 
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