透析是利用半透膜的选择性在溶液里分离大分子和小分子的一种分离技术,常常用于除去蛋白或核酸样品中的盐、变性剂、还原剂之类的小分子杂质,有时也用于置换样品缓冲液。样品在膜的一边,缓冲液在另一边,小分子即向两边扩散直到平衡,而大分子则由于半透膜的阻拦而留在一端,通过不断更换缓冲液,即可将样品中要除掉的小分子稀释到足够低的浓度。该技术自五十年代发展流行起来,主要使用半透膜制成的透析袋作为工具,一直存在透析时间长、样品回收率不高、无法处理微量样品的难题。如今Pierce公司推出三种不同的透析工具有效解决了部分问题。(定购信息进入:生物通商城—试剂—蛋白质化学—分离纯化—透析)
1。Slide-A-Lyzer Mini Dialysis Units
* 100%防渗漏 ,操作简单快速,样品回收率高(>95%),节约时间
这是专为10到100微升的微量样品透析而设计的。把样品加在平底的透析管(类似小量提质粒的离心纯化柱Mini
Spin,可以插入1.5毫升的离心管中,管底是半透膜)中,再插入特制的浮板(浮漂)中,置于缓冲液面10分钟即完成透析。实验表明,100微升pH2.8的IgG洗脱液在1升pH9.4的缓冲液中只需不到10分钟即可平衡到pH9.4。如果在装缓冲液的烧杯底加磁力棒搅拌则更能加速透析速度。这种方法有较高的回收率,能够节约珍贵的样品,并能节约时间,特别适合摸条件的预实验。根据半透膜的孔径和分子量截留值(分离范围)可分为3种规格:3.5K
MWCO、7K MWCO和10K MWCO。以下是一段实物操作示范片。
2.Slide-A-Lyzer Dialysis Cassettes
* >95%的样品回收率,特别设计的样品出口防止渗漏又能保证取出样品时没有残留,特大的表面积:体积比有效加快透析速度,节约时间。
这是专为小量至中量体积的样品透析而设计的,外形如同一个扁平的盒子,两面是半透膜,中间是由膜、硅胶垫圈和塑料框密封的腔体,只在盒的一角留有注射器针头插孔。用时只要将注射器针头插入孔中刺穿硅胶垫圈,加入样品,抽出空气后拔出针头,硅胶垫圈的孔会自行封闭。将透析盒夹在特制的浮漂上即可放入透析液中。由于表面积:体积比大,透析速度快,相比传统方法至少可以节约一半以上的时间。取样时只要插入注射针头,倒转盒子使出口向下即可吸出盒内所有的样品,回收率在95%以上。由于半透膜是透明的,回收前样品体积可以直接估算出。根据样品量的大小,透析盒有4种不同大小的型号:0.1-0.5ml、0.5-3ml、3-12ml和3-15
ml。同样的,根据半透膜的孔径和分子量截留值(分离范围),每种型号都有3种规格:3.5K
MWCO、7K MWCO和10K MWCO。以下是一段实物操作示范片
3.SnakeSkin Dialysis Tubing
这种改良的透析袋特别适合大量(15-100ml)样品透析。传统的透析袋是压成扁平的,需要预浸泡处理才能将管口张开,而湿的透析袋很软,又容易贴在一起,加样时常常令人手忙脚乱。Pierce的这种SnakeSkin
Dialysis Tubing是将35英尺(约10.5米),圆形直径22毫米(相当于34mm的扁平管)的透析袋压缩制成8英寸长的中空管,用时只要拉出需要的长度、剪下、用透析夹封好一端,直接加样到管中,再封好另一端(不要太满,因为透析时样品体积会变大)即可开始透析。由于压缩后的管子是皱的,可以拉长,所以商标叫SnakeSkin。同样的,根据半透膜的孔径和分子量截留值(分离范围)分为3种规格:3.5K
MWCO、7K MWCO和10K MWCO。每厘米的透析袋可容纳3.7毫升样品,通常用于处理15-100ml样品量。请看操作示范
有关透析的一些常见问题请参考科研园地中经验交流栏目中的实验FAQ(或直接进入留言版)。