从全血采样、保存、运输到RNA纯化[新品推荐]

【字体: 时间:2002年03月01日 来源:

编辑推荐:

  

    一种创新的技术将全血中提取RNA的各关键步骤——从全血的采集、保存、运输到RNA纯化——整合起来,使血液RNA的纯化变得如此灵活方便——强大的PAXgene Blood RNA System,可以在室温下保存全血样品达5天之久,使血液样品的采集和运输不再成为难题!结合著名的QIAGEN公司简单快速的高质量RNA纯化技术,制备完整、保持原有信息丰度的高质量RNA实在是轻而易举!让你可以彻底抛弃液氮罐、酚氯仿抽提和氯化锂沉淀等无尽的烦恼,享受工作前所未有的轻松和简便。

血液采集
    PAXgene系统提供标准化的BD Vacutainer(真空采血管,室温保存),配合使用一次性消毒采血针作静脉穿刺,采血管内的负压会迫使血液自动吸入管中,当搜集的血液达到2.5毫升刻度线时停止采血。采血管中本身已经预装了6.9毫升的RNA稳定试剂,拔出针头后只要将采血管轻轻颠倒8—10次将二者混匀即可。

样品保存和运输
    有许多实验需要从血液中提取RNA,这其中最大的难题是RNA非常不稳定:研究表明在采血后的短短几个小时内RNA即迅速且显著降解,另外部分RNA在采血后受到诱导,表达增加。这种RNA降解和基因的体外诱导表达会导致在分析体内基因转录本丰度时出错,甚至低丰度的信息丢失。

    PAXgene系统中的采血管内预装的RNA稳定剂能够阻断RNA的降解以及防止体外诱导产生新的RNA转录本。混合后的血液样本可以在室温下稳定5天,在4度条件下稳定至少90天,方便样品的保存和运输。对于需要在不同时间或地点采样,背着液氮罐到处跑的研究人员来说,这绝对是个好消息——不必担心降解而忙着作实验,可以等搜集一批样品再统一处理,提高工作效率,节约时间和精力。此前曾经介绍过的RNeasy Protect Kit 只适用于组织和培养细胞,不适用于全血,RNeasy Protect Bacteria Kit 只适用于细菌,现在这个PAXgene系统则是彻底解决全血的RNA保存和纯化的问题。

RNA纯化
    将保存的样品离心,前面提到的RNA稳定试剂包含裂解液,得到的核酸沉淀经过洗涤后重悬,加入含有蛋白酶K的裂解液进行彻底消化,离心除去剩余的杂质,上清加入乙醇后转入QIAGEN公司特别设计的RNA纯化柱,离心后RNA被吸附在特制的硅胶膜上,经洗涤出去杂质后即可用洗脱液将RNA洗脱,得到高纯度的RNA。可以用于包括定量RT—PCR、普通RT—PCR、NASBA、表达芯片分析、cDNA合成、核酶保护性分析、Northern Blot、mRNA筛选以及引物延伸等多种用途。

标准化
    Paxgene系统为制药、科研、临检提供从采血到RNA纯化的标准化的整合方案,无需其他试剂盒、没有其他不确定因素、无需液氮罐等特殊设备、无需酚氯仿和氯化锂,只要一个试剂盒,一切搞定。

Stabilization of Gene Expression Using the PAXgene Blood RNA System


Blood was collected and RNA was isolated using either  A  standard methods (collection in EDTA tubes; no stabilization; RNA isolation using a guanidinium-based method), or  B  the PAXgene Blood RNA System (for RNA stabilization and isolation). The graphs show changes in expression of 12 genes after blood collection, measured using real-time RT-PCR. (Data kindly provided by Source Precision Medicine, Boulder, Colorado, USA.)

Detection of Tyrosinase Following Blood Storage

Blood samples were collected from 6 different donors, spiked with tumor cells expressing tyrosinase, and stored for up to 10 days at room temperature. RT-PCR was used to measure levels of tyrosinase.  A  1 cell per 2.5 ml blood;  B  10 cells per 2.5 ml blood. WB: tyrosinase detection in RNA isolated from whole blood collected and stored in standard EDTA tubes. PAX: tyrosinase detection using the PAXgene Blood RNA System for sample collection, and RNA stabilization and isolation. (Data kindly provided by LMO, Munich, Germany.)

 

 

我来说两句
0  条评论    0 人次参与
登录 注册发布
最新评论刷新
查看更多评论 > >

订阅生物通快讯

订阅快讯:

最新文章

限时促销

会展信息

关注订阅号/掌握最新资讯

生物通首页 | 今日动态 | 生物通商城 | 人才市场 | 核心刊物 | 特价专栏 | 仪器龙虎榜

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号