Adeno-X 腺病毒纯化试剂盒[新品推荐]

【字体: 时间:2002年08月16日 来源:

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    由于腺病毒感染细胞后DNA游离于宿主基因组外,整合突变致癌可能性小,基因毒性低,而且有较大的宿主范围,可感染分裂期及非分裂期细胞;另外重组腺病毒相对稳定,经得起纯化、浓缩;其结构、特性的研究较深入,容易复制,操作简单,可获得较高的滴度,这使得重组腺病毒载体作为基因治疗中的基因转导载体越来越受到人们的重视,它的生产纯化技术的最终成熟是以腺病毒作为载体的基因治疗技术商业化的关键。

    传统的密度梯度离心虽然行之有效,但是技术要求高、花费时间长;超速离心步骤不但要求昂贵的设备,人为操作影响因素多,更要花上3、4天的时间,而且受离心容量的限制,不易放大规模。

    BD Biosciences集团旗下的Clontech公司推出的Adeno-X 腺病毒纯化试剂盒,则相对简单多了。这是一个基于层析技术的完整的纯化系统,能让你在短短3小时内安全、快速简便地纯化和浓缩重组腺病毒。试剂盒有两种规格,分别适用于大规模纯化和小量尝试。而且是同时从培养液和细胞中一起收获病毒,从而获得稳定高产,减少损失。

  • 3小时内纯化重组病毒
  • 无需氯化铯梯度/超速离心
  • 产量稳定——可放大性;易控性;稳定性

简单的层析过程

    没有超速离心,取而代之的是一种由VIRAPUR推出的特殊的膜,能根据腺病毒独特的表面特征,特异吸附腺病毒颗粒。试剂盒提供的一次性滤器——Adeno-X纯化过滤器能适配一次性针管或者真空泵,当含有病毒的溶液流经滤器,腺病毒颗粒即被滤器中的这种膜截留。截留的病毒颗粒可以用很小体积的洗脱液洗脱下来。这个过程,从收细胞到纯化,只需要2—3小时可以搞定。

    这个纯化系统由四个部件组成:储液瓶、套管、滤器和真空系统。当然,滤器是整个组合中的关键部分。在标准制备试剂盒中,滤器连接BD Luer-Lok tip syring,以针筒作为另一个真空系统。Mega试剂盒则提供连接管,以便较大的Mega滤器可以连接真空泵。

    真空用于将腺病毒粗提液(即培养基上清和细胞裂解上清混合)从储液瓶抽过滤器,经过洗涤后滤器和Luer-Lok tip syring相连,用少量洗脱液洗脱病毒颗粒。节省浓缩过程。

    无论是纯度还是效价,这个试剂盒的纯化结果和氯化铯梯度离心的结果相当。病毒颗粒:可感染病毒的比例在25:1—100:1之间。而且这个方法无需额外训练,简单易行。

    标准试剂盒(K1654-1,-2)可以得到1012的病毒颗粒(1—5x1010 ifu)Mega试剂盒的产量是标准的10倍试剂盒提供所有重要的试剂,你只要准备PBS、DNase和针筒就可以了。你会发现,纯化腺病毒从未如此简单过。

配合Clontech的Adeno-X 腺病毒表达系统,工作更简单方便

 

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