准确、快速、高效——通过RNA干扰去除靶标基因的表达[新品推荐]
【字体:
大
中
小
】
时间:2003年07月10日
来源:
准确、快速、高效 |
| ——通过RNA干扰去除靶标基因的表达 RNA干扰(RNA interference or RNAi)是一个自然存在的以双链RNA为中介降解具有相同序列RNA的机制。与其相关的过程存在于几乎所有已经检验过的真核细胞内。RNAi迅速成为一个研究基因功能、进行药物筛选的日益重要的手段。在哺乳细胞中,须利用短约21碱基的双链RNA(siRNA)来获得对目的基因的特异性干扰。为获得有效、特异性的RNA干扰,siRNA的设计、制造必须尽可能准确无误。 |
用于siRNA的RNA试剂: 化学合成的siRNA:不需要使用者做准备,但成本高,价格贵,相对不稳定。 转录产生的siRNA:使用原核RNA聚合酶进行试管转录产生,须多步酶反应、提纯。 从长双链RNA经酶切产生的siRNA:以靶标基因的cDNA为模板进行试管转录产生正义及反义RNA,退火,再利用RNaseIII将其切割成短双链RNA。比经转录产生siRNA省时间,但有更大可能引起非特意性RNAi。 用于siRNA的DNA试剂: 通过将DNA分子导入细胞,在细胞内产生siRNA。通常将编码siRNA或具有类似作用的小发卡型RNA(shRNA)的模板DNA克隆到建有真核RNA聚合酶III启动子及终止子的质粒载体上,利用真核RNA聚合酶III在细胞内转录出siRNA或shRNA。这一聚合酶适合产生小RNA,特别是其终止子是4-5个T碱基,在RNA 3’端留下2个U,正好符合siRNA的要求。这一方法需要克隆、质粒筛选、测序。另外,为满足克隆需要,大多数现有质粒载体的设计要求改变聚合酶III启动子或产生的siRNA有多余碱基。克隆过程中的质粒自连接也是一个经常发生的问题。 |
美国绿阳生物技术与制药公司(Allele Biotechnology &Pharmaceuticals, Inc. San Diego, California. www.allelebiotech.com)进行了大量以DNA为试剂的RNAi方法研究,现由其在华合资企业广州绿阳生物工程有限公司独家在中国推出优质的Allele RNAi试剂盒,为中国生物医药科研同仁提供方便、低价、高效率、适于应用者灵活使用的先进研究手段。 |
The most flexible platform for RNAi |
LineSilenceTM:
无须克隆、测序,只要求提前准备好靶标基因特异性PCR引物,进行PCR(可以提纯PCR产物),转染细胞——当天即可完成全部实验。 用于PCR的DNA引物价格低廉,使在同一个靶标基因mRNA上实验多点RNAi,或高通量检查多个基因的功能成为可能;PCR产物很易再产生,也可以进一步克隆到质粒、病毒等任何载体上。LineSilenceTM是灵活有效的极佳RNAi技术平台。
| |
pSilenCircleTM: 绿阳公司自行设计构建的RNAi质粒利用特殊酶切,几乎不会产生自连接。使用者可以直接将合成的双链DNA连到质粒上,成功率极高,不需要进行大量质粒筛选或蓝白选择。重要的优势是pSilenCircleTM产生的siRNA或shRNA不带有与靶标mRNA不配对的碱基,从而保证高效性和特异性。
| |
l 绿阳公司同时提供RNA、DNA oligo的高质量化学合成、提纯、处理 l 根据客户要求,使用特殊设计软件提供实验证明有效的RNAi的设计 l 进行其它技术指导和科研合作。 详情和定货,请直接与广州绿阳生物工程有限公司联系: rnaiusa@hotmail.com rnaiusa@allelebiotech.com FAX / TEL:020-82228559; TEL:020-82220400 联系人:李小姐
|
|
|
今日动态 |
人才市场 |
新技术专栏 |
中国科学人 |
云展台 |
BioHot |
云讲堂直播 |
会展中心 |
特价专栏 |
技术快讯 |
免费试用
版权所有 生物通
Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved
联系信箱:
粤ICP备09063491号