以RNA为模板合成cDNA，结合PCR扩增的RT-PCR技术，由于可以快速灵敏的对基因表达信息进行检测或定量分析，相比其他RNA分析技术更为灵敏和更易于操作，成为RNA分析技术中最为常用的一种。

    但是，RT-PCR同时也受限于PCR和逆转录反应中两种酶的特性，在遇到复杂模版或者特殊条件时也常常会出现困难，例如：GC含量丰富或者二级结构复杂的模版，长片断的模版无法扩增等等，这往往需要根据具体情况另外选择不同的特殊用途的试剂盒，费时间也费钱。作为实验室来说，选择一个价格实惠、在各种复杂条件都能出结果的全能产品才是明智之选。

        cMarster RT_plus PCR是一个性能优异、灵活、适用范围广、能对付多种复杂条件的试剂盒,特别满足普通实验室的各种需要，是非常超值之选。其优异特性的原因在于cMarster的两个王牌组分——cMarster RT酶和TripleMaster 3合1 PCR酶的巧妙结合。

    与其他的逆转录酶相比，cMarster RT酶有更长的扩增能力，更高的热稳定性和灵敏度，可以在更高的温度下进行逆转录反应，得到更多的全长cDNA。

RT-PCR产物的大小受限于逆转录酶合成cDNA的能力，尤其是克隆较大的cDNA时。以RNA为模版合成cDNA的逆转录酶含有内源RNaseH活性，会降解RNA:DNA杂合双链中的RNA链，使得RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，限制了cDNA合成的产量和长度。消除的RNaseH活性有助于提高产物的长度和产量。但是即使是消除RNaseH活性，多数的逆转录酶往往也只能合成小于10kb的cDNA。 cMarster RT酶优异的特性可以扩增长达12.5kb的片断（如图）。

Fig. 3: Two Step RT-PCR of multiple targets and RNA sources. M: DNA Ruler LadderMix 0.1–10 kb (MBI Fermentas).

    普通逆转录酶反应温度为37—42度，然而一些有丰富二级结构的复杂模板或者是GC含量丰富的模版在常温下扩增困难，需要将逆转录反应置于较高温度下进行以改善扩增。较高的反应温度可以消除RNA的二级结构――cMarster RT酶在37—60度的温度范围内都能保持良好的活性，即使是在其他RT已经失活的60度，cMarster RT酶依然可以继续合成，使得GC含量高的RNA逆转录不再是问题！较高的反应温度除了有助于打开RNA二级结构，增加反应产量，还也可以增加逆转录反应的特异性，尤其是当使用基因特异性引物（GSP）进行cDNA合成时。在37—42度条件下进行的逆转录反应“浪费”了基因特异性引物的特异性，而较高的反应温度允许使用Tm较高的基因特异性引物，增加逆转录反应的起始特异性，降低背景，获得特异性产物。

        cMarster RT_plus PCR中的另一个王牌是TripleMaster 3合1 PCR酶。

        普通的Taq酶扩增能力很强但是错配率高，为以后的克隆等实验带来诸多麻烦，虽然高产但是最大只能扩增3—5kb的片断；而本身带有校读功能的高保真酶有很高的保真度，不易出错，可能够扩增较长的片断，但是产量偏低。这个TripleMaster则是一个高保真的混合酶——在保留Taq特有的高效扩增能力，保证高产的同时，还有效降低了Taq的错配率，大大提高了保真度，使得PCR结果更忠实于模版，减少错配的可能性。另外更使得这个酶能够扩增特别长的片断——包括长达40多kb的lambda DNA和30kb以上的基因组DNA。

        除此之外，TripleMaster 3合1 还擅长对付GC 含量特别丰富或者有复杂二级结构的模版，并具有很好的热稳定性——即使是反应超过40个循环也没有问题！无论是单独使用或者是配合cMarster RT都一样出色。

    RT-PCR通常可分为单管一步法，或者两步法：一步法的优点在于简便操作，RT和PCR反应之间无需开管从而减少污染的可能性，另外由于得到的全部cDNA产物都一起经PCR扩增，使得一步法的灵敏度更高。但是由于单管反应时RT 和PCR 都不能在最佳条件下进行并且容易相互干扰，这使得一步法通常只适宜用基因特异性引物扩增较短的基因，定量PCR等。相比之下两步法由于RT和PCR反应分别在最优化的条件下进行，使得两个反应充分发挥各自特点，更为灵活而且严谨，适合对付未知模版或者是较为困难的模版，以及多个基因的RT-PCR，由于容易优化条件和方便对照排错，两步法是更为常见的做法。但是由于两步法通常是取第一步反应产物的1/10进行第二步反应，使得其灵敏度不如前者高。

     cMarster RT_plus PCR Kit提供两种反应缓冲液，让你可以根据不同的实验需要自由选择One-step RT-PCR 或者是two step RT-PCR。一步法的模版范围是0.1kb—6kb， 两步法则可以从0.1kb到12.5kb!  这个试剂盒也可以单独作为cDNA第一链合成，或者配合其他的PCR酶使用，为你提供最大的灵活和方便！

       cMarster RT_plus PCR Kit只要一个试剂盒就能够应付日常RT-PCR中各种情况的挑战，无论是常规RT-PCR，还是二级结构或者GC 含量特别丰富的模版、或者是特别长的模版，都能应付自如，而且还保持了相当高的灵敏度——少至10pg Total RNA，甚至是单细胞RT-PCR都一样胜任！（全文：Single-cell RT-PCR analysis of Paramecium primaurelia with the cMaster RTplus PCR system）

Fig. 1: One Step RT-PCR amplifikation of an Alpha Tubulin cDNA fragment from various amounts of total RNA. Lane 1: 1 µg Lane 2: 100 ng Lane 3: 10 ng Lane 4: 1 ng Lane 5: 100 pg Lane 6: 10 pg M: 100 bp ladder (NEB)

One-step RT-PCR from individual cells of P. primaurelia. The surface antigen expression of Paramecium primaurelia individual cells could be shown for the first time by the detection of their mRNA. G and D label the RT-PCR products of the serotypes G and D. M: 100 bp ladder

Two-step multiplex RT-PCR from single cells of P. primaurelia. 10 ng of genomic DNA were added to each of the samples from lanes 1+2 during the RT step. G and D mark the RT-PCR products of the serotypes G and D, and k marks the genomic control amplicon. M: 100 bp ladder

        经常做逆转录实验一般都会有自己偏爱用的产品，不过cMarster RT_plus PCR Kit真是很值得尝试——拥有如此优异的性能和广泛的适用范围的产品，却是相当适中的价格，而且不再需要为特殊的实验另外购买特殊产品——实在是RT-PCR 的超值之选。

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组成：
cMaster™ RT enzyme (15 U/µl) 
RTplusPCR buffer with 25 mM Mg2+ 
Prime RNase Inhibitor (0.5 µg/µl) 
10 mM dNTP Mix 
Molecular biology grade water (RNase-free) 
cMaster™ PCR Enzyme Mix (5 U/µl) 
10x Tuning® Buffer with 25 mM Mg2+

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