甲基化研究对于基因的调控和肿瘤的发生有非常密切的关系。在一般正常的细胞中,基因调控区CpG岛处于非甲基化的状态。而当细胞发生癌变后,这些CG区域往往呈现甲基化状态。英国医学刊物《Lancet》报道奥地利因斯布鲁克医学院的专家们早就可以通过检测大便中DNA的甲基化变化,把健康人的大便与结肠癌患者的大便区分开。大便标本中SFRP2 甲基化的程度是诊断结肠癌*灵敏的标记。研究人员发现,肿瘤的发生以及一些遗传病的出现和基因甲基化有非常密切的关系。目前DNA甲基化研究是肿瘤分子生物学研究的一个重要领域。
Pyrosequencing技术作为一种新的序列分析技术,能够快速地检测甲基化的频率,对样品中的甲基化位点进行定性及定量检测,为甲基化研究提供了新的途径。Pyrosequencing是一种通过合成方法进行序列分析的方法,它通过核苷酸和模板结合后释放的焦磷酸引发酶级联反应,促使荧光素发光并进行检测。这项技术曾经被用作单核苷酸多态性(SNP)的基因型和单倍型的检测,以及细菌和病毒的鉴定和分型研究。这项技术的一个主要特点是在Pyrogarm™软件上显示的峰值高度来自于序列分析的原始数据,通过峰值的高度可以精确的检测混合DNA模板中等位基因的频率。
Pyrosequcing系统可以获得以下结果:
1 那些DNA序列位点发生甲基化?
2 每个位点的甲基化程度是多少?
3 这些位点的甲基化和疾病的相关性?
分析结果:
参考文献:
1. http://www.ebiotrade.com/emgzf/genenews200404/gene5.htm
2. Colella S., Shen L., Baggerly K.A., Issa J.-P.J., Krahe R. Sensitive and quantitative universal Pyrosequencing methylation analysis of CpG sites. BioTechniques, Jul 2003; 35: 146-150.
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4. Kiss, C., Nishikawa, J., Takada, K., Trivedi, P., Klein, G., Szekely, L. T cell leukemia I oncogene expression depends on the presence of Epstein-Barr virus in the virus-carrying Burkitt lymphoma lines.PNAS, 2003; 100(8): 4813-4818.
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其它相关资料:
1. Pyrosequencing技术有声讲座:http://www.ebiotrade.com/speech/moreinfo.asp
2. 简便快速的SNP和InDel多重分析 ——Pyrosequencing技术的特色应用报道 http://www.ebiotrade.com/emgzf/genenews200302/gene6.htm
3. SNP研究前沿及主要技术方法 http://www.ebiotrade.com/emgzf/genenews200302/gene2.htm
4. Pyrosequencing技术在分子诊断方面的应用 http://www.ebiotrade.com/emgzf/genenews42002/dir.htm
5. 微生物鉴定: Pyrosequencing技术快速检测炭疽杆菌\百日咳杆菌\李斯特杆菌的应用 http://www.pyrosequencing.com/pages/m_m_scientific.html
6. 临床遗传学: 研究基因与疾病相关性,疾病相关基因突变研究 http://www.pyrosequencing.com/pages/clinical_genetics.html
7. Pyrosequencing技术是研究肿瘤细胞甲基化程度的*佳手段 http://www.pyrosequencing.com/oncology/cpg_methylation.html
8. 使用Pyrosequencing技术进行人乳头状瘤病毒基因分型研究(见基因快讯2004第2期,可以向基因有限公司索取)
9. 使用Pyrosequencing技术发表的250多篇国际论文(Science/Nature/PNAS...)http://www.pyrosequencing.com/pages/publications.htm