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突破109 包装效率的上限
从cDNA文库中发现新基因的主要挑战来自于该基因的转录产物往往是低拷贝的,很是稀少,这就使尽可能构建一个具有最佳代表性的cDNA文库成为重中之重。Gigapack® 是商业化的包装抽提物中最先打破包装效率1 x
109 pfu/ug上限的产品。拥有了包装效率这么高的包装提取物,对所有想构建代表性好的科学家来说真是幸事,发现稀有转录产物的研究变得容易多了(图 1)。
去除包装提取物中的限制性酶系统是提高效率的关键因素。以前的lambda包装提取物产品通常带有限制性酶系统,会切割外源DNA,对DNA克隆有显著的负作用。Stratagene的科学家通过去除绝大部分引起麻烦的酶,开发了著名的Gigapack家族系列抽提物,帮助研究者能够轻而易举地获得极高的包装效率。岁月流逝,Stratagene完善Gigapack的步伐并未停止,更多的酶被从抽提物中去除,而该系列中一些特别的Gigapack品种甚至可以用来包装非常大的片段,包装长达47— 51 kb的重组子已不是天方夜谭了。
不能用于测序、定点突变和其它许多克隆完成后经常要用到的一些操作,极大地限制了lambda文库的应用 |