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丰富多彩的二级检测试剂
关键字:检测    www.ebiotrade.com  时间:2004年7月16日    来源:

 

丰富多彩的二级检测试剂

    无论你使用荧光显微镜、流式细胞仪、微量板测定或者印迹法检测技术,我们的检测试剂可以帮助你提
高实验的灵敏度,得到高信噪比的结果。

 

使用物种特异的标记二抗来检测一抗
    在每一个标记二抗产品的问世过程中,MP公司从使用高质量的抗体、到最后细胞水平的质量检测,对每一个步骤都严格控制,确保产品的非特异性结合降到尽可能低的水平,同时维持高水平的特异性结合能力。我们的抗IgG及抗IgM的抗抗体在经过亲和纯化之后,又使用不同种的血清进行吸附滤过,使交叉反应的可能性降到最低,再与多种不同的Alexa荧光染料分别进行偶联(表1,图1)。关于该类产品的详细信息请参考我们的网站。

    我们还有荧光标记和酶标记的F(ab’)2片段(表1),及鸡源抗体产品。这些二级检测试剂与哺乳动物的Fc片段没有交叉反应,非特异性结合水平都很低。鸡源抗体产品有鸡抗人、鸡抗小鼠、鸡抗兔、鸡抗大鼠及鸡抗羊IgG抗抗体等,标记物有我们的产品中最常见的三种Alexa荧光染料。另外,选择我们的辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)标记的二抗,配合荧光或化学发光底物,也可以实现超高灵敏度的检测。

图1,野生型果蝇(Canton-S)胚胎的周围神经系统用单抗22c10(识别微管结合蛋白)进行标记,二抗为绿色荧光的Alexa Fluro488标记的兔抗小鼠IgG抗体。胚胎发育中的牙带区(denticle bands)细胞分裂旺盛,以兔源抗组蛋白H3的抗体标记,二抗为红色荧光染料Alexa Fluro594标记的羊抗兔IgG抗体。最后细胞核在中枢神经系统密度较大,用兰色荧光染料DAPI进行染色。图片由Edinberg大学的Neville Cobbe提供。

表1:部分MP公司的荧光标记IgG二抗产品

注:①*平均最大吸收及发射光波长,单位纳米nm;②F(ab’)2片段;③用人及小鼠血清、小鼠浆细胞瘤/杂交瘤蛋白及纯化的人副蛋白进行交叉吸附;④用人及小鼠血清蛋白进行交叉吸附滤过。
除F(ab’)2片段包装为250ul之外,抗体的包装都是0.5ml;
字体加重的产品都是本期BioProbes的新产品。

 

图2,固定化的牛肺动脉内皮细胞的微管结构。一抗为小鼠源的单抗anti-α-tubulin抗体,二抗为生物素标记的羊抗小鼠IgG抗体的F(ab’)2片段,最后用绿色荧光染料Alexa Fluro488标记的细菌亲和素显色。细胞DNA用兰色荧光染料Hoechst33342、核仁用红色荧光染料Propidium Iodide分别显色。

 

图3,图示Molecular Probes公司荧光染料Alexa Fluro610-R-藻红蛋白-亲和素标记物的优良的信噪比,在同类产品中遥遥领先。

 

 

    我们还有荧光标记和酶标记的F(ab’)2片段(表1),及鸡源抗体产品。这些二级检测试剂与哺乳动物的Fc片段没有交叉反应,非特异性结合水平都很低。鸡源抗体产品有鸡抗人、鸡抗小鼠、鸡抗兔、鸡抗大鼠及鸡抗羊IgG抗抗体等,标记物有我们的产品中最常见的三种Alexa荧光染料。另外,选择我们的辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)标记的二抗,配合荧光或化学发光底物,也可以实现超高灵敏度的检测。

用荧光-亲和素标记试剂来检测生物素标记的目标分子
    生物素-亲和素间的强相互作用在生命科学研究中有着广泛的应用。MP公司开发出了具有19种不同颜色荧光的荧光染料标记的亲和素产品,可以满足客户的特殊要求。另外我们还有HRP标记、AP标记、及Alexa荧光染料-藻胆蛋白串联标记的细菌亲和素产品(见下),关于产品的详细信息请登陆我们的网站。

用藻胆蛋白串联标记物进行多目标检测
    为了更好地发挥Alexa染料的优异性能,结合我们的专门偶联技术,本公司开发出了一系列的Alexa荧光染料-R-藻红蛋白和Alexa荧光染料-异藻青蛋白串联复合物产品。在这些串联复合物中,藻胆蛋白作为荧光供体,与长波长的荧光染料共价连接,后者作为荧光受体,接收前者所发出的荧光。经过精心优化,建立起荧光共振能量转移(FRET)通路,使藻胆蛋白所发出的荧光可以激发Alexa荧光染料发出长波长的荧光。

图4,单波长激发光488nm下可以激发出五种不同颜色的发射光。①Alexa Fluro488标记的羊抗小鼠IgG抗体;②R-藻红蛋白标记的羊抗小鼠IgG抗体;③Alexa Fluro610-R-藻红蛋白标记的羊抗小鼠IgG抗体;④Alexa Fluro647-R-藻红蛋白标记的羊抗小鼠IgG抗体;⑤Alexa Fluro680-R-藻红蛋白标记的羊抗小鼠IgG抗体。

表2:MP公司的Alexa荧光染料-藻胆蛋白串联标记产品。

用藻胆蛋白串联标记物进行多目标检测
    为了更好地发挥Alexa染料的优异性能,结合我们的专门偶联技术,本公司开发出了一系列的Alexa荧光染料-R-藻红蛋白和Alexa荧光染料-异藻青蛋白串联复合物产品。在这些串联复合物中,藻胆蛋白作为荧光供体,与长波长的荧光染料共价连接,后者作为荧光受体,接收前者所发出的荧光。经过精心优化,建立起荧光共振能量转移(FRET)通路,使藻胆蛋白所发出的荧光可以激发Alexa荧光染料发出长波长的荧光。

    抗体和细菌亲和素与这些串联复合物偶联后(表2),可以广泛应用于流式细胞仪系统,其优点是信号强、背景低(图3)。这种Alexa荧光染料-R-藻红蛋白串联复合物在单激发光源下选择合适的滤光片可以实现对五种不同靶目标的同时测定(图4);Alexa荧光染料-异藻青蛋白串联复合物可以同时检测三个不同的靶目标。我们的另外一个产品-Zenon抗体标记试剂盒中,有的也包括了藻胆蛋白串标物,详见我们的网站 www.probes.com/zenon

用Zenon抗体标记试剂盒简化多颜色标记过程
我们的Zenon抗体标记试剂盒是一个多用途的产品,可以用于小鼠、兔或人源IgG的标记,标记物可以是荧光染料(如MP公司的Alexa系列)、半抗原或酶类;且操作简单易行(图5)。这项技术在许多方面都可以取代二级检测试剂使用,且大大简化了多种颜色免疫标记过程,这在此前往往需要在同一个操作过程中使用同种亚型的多种抗体,是一个费时、或者说是不切实际的过程。选择与你的一抗相对应的Zenon抗体标记试剂盒,其中包括了所需的荧光染料、生物素或酶标记物;扩展型的选择方式是混合匹配,可以在不同的染料-抗体间自由组合,用于流式细胞仪(图6)或成像分析(图7)实验。

图5,Zenon标记抗体可以在10min内完成。

图6,人外周血单核细胞用特异识别CD3、CD4、CD8的抗体分子标记,用淋巴细胞gate进行鉴别。抗CD3抗体为小鼠源的IgG抗体,预先用Zenon Alexa Fluor488小鼠IgG1标记试剂盒进行标记;小鼠源anti-CD4抗体预先用Zenon Alexa Fluro647-R-藻红蛋白小鼠IgG1标记试剂盒进行标记;小鼠源anti-CD8 IgG2α抗体预先用Zenon R-藻红蛋白小鼠IgG2α标记试剂盒进行标记。上图为CD3对CD4、中图为CD3对CD8、下图为CD8对CD4的分离图谱,都显示了很好的分离效果,及预料之中的CD4+和CD8+细胞的完全分离。

图7,A431细胞,用标记抗体分别检测组蛋白(histone)和表皮生长因子受体(EGFR)。组蛋白用小鼠抗组蛋白抗体检测,该抗体用Zenon Alexa Fluor488小鼠IgG2α标记试剂盒进行标记。EGF受体用小鼠抗-EGF受体单克隆抗体IgG2α检测,该抗体预先用Zenon Alexa Fluor555小鼠IgG2α标记试剂盒进行标记。

请登陆我们的网站以获取更多的产品信息,以及用于标记小鼠、兔和人IgG的Zenon抗体标记试剂盒的完全产品列表。

www.probes.com/zenon

多项产品正在优惠促销中,详情请登录Invitrogen中文网站进行查询。

http://www.invitrogen.com.cn/news/link/04_Jul_promotion.htm

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