方便、可靠地保护蛋白免受磷酸酶攻击的新方法

 许多生物学过程和通路的调节都伴随着磷酸酯的形成和去除；而蛋白的磷酸化状态的平衡是由蛋白激酶和磷酸酶相互影响达到的。为了了解这些通道，大量的研究工作正在制药公司和研究院所开展。其中一个重要的步骤就是准确的观察一般和特异的磷酸化状态，而这就需要对磷酸化状态的有效保护。

磷酸化的蛋白可以被非特异性的磷酸酶（例如：碱性磷酸酶），特异性的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶、酪氨酸蛋白磷酸酶或双重特异性磷酸酶去磷酸化。这里，我们就一种新的磷酸酶抑制剂混合片的性能做一介绍，称之为PhosSTOP。PhosSTOP是一种即用型的片剂，其中的一些磷酸酶抑制剂只需要纳摩尔级的量。无需花费漫长的时间寻找合适的磷酸酶，也不必繁琐的称量和混合。PhosSTOP可同时持续抑制包括酸性和碱性磷酸酶，及丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶（PP1, PP2A, PP2B）和酪氨酸蛋白磷酸酶在内的多种磷酸酶。

一片PhosSTOP可以溶解在10ml的缓冲液中（图1）。PhosSTOP具有极好的溶解性，如果需要，可以将2－3片PhosSTOP也可溶解在同样体积的缓冲液中；相反，也同样也可以选用小体积的缓冲液。溶解后的储存液体4℃可以稳定保存一个月以上，－20℃下可以保存6个月。

 
磷酸酶无处不在，每种磷酸酶都有不同的底物特异性；依赖于不同的物种、细胞或组织类型、实验中使用的特异的细胞状态，磷酸酶的种类和数量都会有差异。这里使用PhosSTOP分别测试了几种不同物种来源的磷酸酶，以检测PhosSTOP的抑制效果（表1）。
 

PhosSTOP可应用于多种细胞提取物中磷酸酶的抑制作用，对酸性和碱性磷酸酶，丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶（PP1, PP2A, PP2B）和酪氨酸蛋白磷酸酶的抑制作用（表2）。

磷酸酶活性的检测通过western blots实验检测，例如，丝氨酸磷酸酶特异性抗体（图2）。

PhosSTOP片剂可与含有福尔马林的缓冲液配合兼容使用；适用于福尔马林固定样本，保持组织切片中蛋白的磷酸化状态。

PhosSTOP可有效抑制目的蛋白的去磷酸化，而不会影响后继的蛋白检测（例如：western blot）或是蛋白浓度检测 (例如：BCA或是Bradford)；持续抑制包括酸性和碱性磷酸酶，及丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶（PP1, PP2A, PP2B），酪氨酸蛋白磷酸酶及双特异性磷酸酶在内的多种磷酸酶。

PhosSTOP可抑制多种来源的磷酸酶，包括动物，细菌，植物和酵母细胞；同时还可以与含有福尔马林的缓冲液兼容，适用福尔马林和石蜡固定的组织切片。

PhosSTOP与cOmplete蛋白酶抑制剂兼容，更可实现对磷酸酶和蛋白酶的全面抑制作用。