PhosStop- 磷酸酶抑制剂混片[新品推荐]

【字体: 时间:2007年07月30日 来源:罗氏诊断应用科学部

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  PhosStop- 磷酸酶抑制剂混片

方便、可靠地保护蛋白免受磷酸酶攻击的新方法

 

 许多生物学过程和通路的调节都伴随着磷酸酯的形成和去除;而蛋白的磷酸化状态的平衡是由蛋白激酶和磷酸酶相互影响达到的。为了了解这些通道,大量的研究工作正在制药公司和研究院所开展。其中一个重要的步骤就是准确的观察一般和特异的磷酸化状态,而这就需要对磷酸化状态的有效保护。

磷酸化的蛋白可以被非特异性的磷酸酶(例如:碱性磷酸酶),特异性的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶、酪氨酸蛋白磷酸酶或双重特异性磷酸酶去磷酸化。这里,我们就一种新的磷酸酶抑制剂混合片的性能做一介绍,称之为PhosSTOP。PhosSTOP是一种即用型的片剂,其中的一些磷酸酶抑制剂只需要纳摩尔级的量。无需花费漫长的时间寻找合适的磷酸酶,也不必繁琐的称量和混合。PhosSTOP可同时持续抑制包括酸性和碱性磷酸酶,及丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP1, PP2A, PP2B)和酪氨酸蛋白磷酸酶在内的多种磷酸酶。

一片PhosSTOP可以溶解在10ml的缓冲液中(图1)。PhosSTOP具有极好的溶解性,如果需要,可以将2-3片PhosSTOP也可溶解在同样体积的缓冲液中;相反,也同样也可以选用小体积的缓冲液。溶解后的储存液体4℃可以稳定保存一个月以上,-20℃下可以保存6个月。

 
磷酸酶无处不在,每种磷酸酶都有不同的底物特异性;依赖于不同的物种、细胞或组织类型、实验中使用的特异的细胞状态,磷酸酶的种类和数量都会有差异。这里使用PhosSTOP分别测试了几种不同物种来源的磷酸酶,以检测PhosSTOP的抑制效果(表1)。
 

PhosSTOP可应用于多种细胞提取物中磷酸酶的抑制作用,对酸性和碱性磷酸酶,丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP1, PP2A, PP2B)和酪氨酸蛋白磷酸酶的抑制作用(表2)。


 

磷酸酶活性的检测通过western blots实验检测,例如,丝氨酸磷酸酶特异性抗体(图2)。

PhosSTOP片剂可与含有福尔马林的缓冲液配合兼容使用;适用于福尔马林固定样本,保持组织切片中蛋白的磷酸化状态。


PhosSTOP可有效抑制目的蛋白的去磷酸化,而不会影响后继的蛋白检测(例如:western blot)或是蛋白浓度检测 (例如:BCA或是Bradford);持续抑制包括酸性和碱性磷酸酶,及丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶(PP1, PP2A, PP2B),酪氨酸蛋白磷酸酶及双特异性磷酸酶在内的多种磷酸酶。

PhosSTOP可抑制多种来源的磷酸酶,包括动物,细菌,植物和酵母细胞;同时还可以与含有福尔马林的缓冲液兼容,适用福尔马林和石蜡固定的组织切片。

PhosSTOP与cOmplete蛋白酶抑制剂兼容,更可实现对磷酸酶和蛋白酶的全面抑制作用。

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