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你了解琼脂糖吗?[选购宝典]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2008年11月14日 来源:生物通

摘要:

  做生物实验的人对琼脂和琼脂糖一定都不会陌生。不过要让你说出它们两者的区别,我想不少人都会支支吾吾。反正不一样呗,培养基用的是琼脂粉,电泳用的是琼脂糖。具体有啥学问,听我一一道来。

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做生物实验的人对琼脂和琼脂糖一定都不会陌生。不过要让你说出它们两者的区别,我想不少人都会支支吾吾。反正不一样呗,培养基用的是琼脂粉,电泳用的是琼脂糖。具体有啥学问,听我一一道来。

先来说说琼脂,它的英文名为agar。这个词来源于马来语的agar-agar,意思是胶状物。中国人亦称为洋菜或冻粉。日本人称之为寒天(kanten),因为它在冬天收获。台湾人叫它菜燕,和燕窝的质感差不多。韩国人的叫法是한천(不知道啥意思)。

琼脂作为一种独特的食品在我国已经有悠久的历史。它是从大型海洋藻类石花菜、紫菜、江篱等提取分离制成的,广泛应用于食品和生化等行业。我们常吃的果冻、冰淇淋、糕点、软糖、罐头、八宝粥中都含有琼脂。我国的山东、福建、广东、海南等拥有优越的海洋资源和气候条件,适宜大型海洋藻类的生长,是生产琼脂的主要地区,产品远销世界各地。

琼脂是由琼脂糖(agarose)和琼脂果胶(agaropectin)组成的。琼脂糖是线性的多聚物,基本结构是1,3连结的β-D-半乳呋喃糖和1,4连结的3,6-脱水α-L-半乳呋喃糖。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。它们的结构相似,但带硫酸根和羧基组分,凝胶能力差。

琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解,温度下降到35-40℃时形成良好的半固体状的凝胶,这是它具有多种用途的主要特征和基础。琼脂糖凝胶性能通常用凝胶强度表示。强度越高,凝胶性能越好。质量较好的琼脂糖强度通常在1200克/cm2以上(1%胶浓度)。琼脂糖的凝胶性是由存在的氢键所致,凡是能破坏氢键的因素都能导致凝胶性的破坏。

琼脂糖具有亲水性,并几乎完全不存在带电基团,对敏感的生物大分子极少引起变性和吸附,是理想的惰性载体。在琼脂糖制备过程中需要把琼脂果胶尽量去除,否则琼脂糖有可能存在极微量硫酸根和丙酮酸取代电离基团,就会造成电内渗(EEO),电内渗对质点的移动产生影响。质量较好的琼脂糖硫酸根含量比较低,通常在0.2%以下,电内渗比较小,通常在0.13以下。这也就是琼脂糖比琼脂贵那么多的原因了。

1937年荒木第一次从琼脂中分离出琼脂糖,但直到1961年Hjertin首先发现了琼脂糖优异的使用性能后才引起了越来越多的关注,并开始工业生产。目前,琼脂糖广泛应用于临床化验、生化分析和生物大分子物质的分离等领域。

现在实验室中最常用的琼脂糖应该是西班牙biowest出产的。不过既然我国有这么丰富的海洋资源,就没理由让外国货专美。厦门太阳马公司最近成功研制出电泳级的Fargarose™琼脂糖,完全可以与之媲美。我们将其主要的参数如凝胶强度和电内渗与biowest的琼脂糖进行了比较,发现同是1%的凝胶,Fargarose琼脂糖的凝胶强度(>1200 g/cm2)远远大于biowest的>750 g/cm2,而EEO(0.13)也小于biowest的0.15。而其价格(100g 230元)又低于biowest(100g 约300元)。不愧是国际品质,本土价格。

产品特性:
◆透明度好:溶解快,胶液清澈透明
◆高强度:保证凝胶的强度与弹性,即使是低浓度的凝胶也不易发生破碎。
◆低电内渗:减少对电泳质迁物迁移与分离的影响。
◆极低的背景:没有其它荧光物质干扰,泳带与背景黑白分明,拍摄的图片效果好。
◆没有核酸酶和蛋白酶。

试用装派发中,赶快点击http://www.ebiotrade.com/custom/sunmabio/081104/index.htm申请吧。

附录:凝胶制备方法
1. 配制适量的电泳及制胶用的缓冲液。根据电泳需要,配置合适浓度的电泳及制胶缓冲液。
注:用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相同的。

2. 根据制胶量及凝胶浓度,在加有一定量的电泳缓冲液的三角锥瓶中,加入准确称量的琼脂糖粉(总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量)。

3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
1)胶液浓度<2%: 设置高火加热,胶液沸腾约1分钟直至琼脂糖胶液清澈,保证琼脂糖完全溶解。请戴上防热手套,小心摇动三角锥瓶,使琼脂糖胶液充分均匀。
2)胶液浓度>2%:设置中火加热,胶液开始沸腾后,停止加热,移开三角锥瓶,小心摇动三角锥瓶,然后再次加热,胶液沸腾直至胶液清澈,保证琼脂糖完全溶解。
注:必须保证琼脂糖充分完全溶解,否则,会造成电泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡,停止加热。微波炉中加热时间不宜过长。

3. 使溶液冷却至60℃左右,如需要可在此时加入溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度为0.5ug/ml,并充分混匀。
注:溴化乙锭是一种致癌物质。使用含有溴化乙锭的溶液时,请戴用手套。

5. 将琼脂糖溶液倒入制胶模中,然后在适当位置处插上梳子。凝胶厚度一般在3-5 mm 之间。

6. 在室温下使胶凝固(大约30 分钟-1 小时),然后放置于电泳槽中进行电泳。
注: 凝胶不立即使用时,请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存,一般可保存2~5 天。

(生物通 余亮)

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