快速有效地进行RNA线性扩增[新品推荐]

罗氏公司近日推出一款RNA预扩增试剂盒——LightCycler RNA Pre-Amplification Kit。它为cDNA的制备以及随后的基因表达分析提供了简单而又快速的方法，适用于RNA产量和质量都不高的样品。它利用Ribo-SPIA技术对总RNA进行线性、等温的扩增，能保持原本RNA样品中每个转录本的相对丰度。只需要4个小时，就能从5-50 ng总RNA中获得毫克级的高纯度稳定cDNA。

2008年11月18日，罗氏公司推出一款RNA预扩增试剂盒——LightCycler RNA Pre-Amplification Kit。它为cDNA的制备以及随后的基因表达分析提供了简单而又快速的方法。

现在，对临床的组织或血液样品进行基因表达研究的分析已经成为大势所趋。这些研究能鉴定新的分子靶点并改善分子诊断的工具。然而，临床样品通常体积受限，质量不高，而通常也不能用第二次取样的样品所代替。另外，从小型或组织检查、FFPE切片或少量细胞中提取的RNA质量和数量都很低。RNA的量成为了后续研究的瓶颈。

LightCycler RNA Pre-Amplification Kit提供了一种高灵敏度、高保真的方法，适用于RNA产量和质量都不高的样品。它利用Ribo-SPIA技术对总RNA进行线性、等温的扩增，能保持原本RNA样品中每个转录本的相对丰度。只需要4个小时，就能从5-50 ng总RNA中获得毫克级的高纯度稳定cDNA。扩增得到的cDNA能直接用于qPCR研究，任何定量PCR平台都可。

Ribo-SPIA技术的原理如下图。它利用SPIA DNA/RNA嵌合引物、DNA聚合酶和RNase H在等温条件下进行，请看步骤1、2、3。RNase H用来降解新生成cDNA链5’端DNA/RNA异源双链中的RNA，使DNA序列再次暴露，第二次结合SPIA DNA/RNA嵌合引物。DNA聚合酶随后起始引物向3’端延伸，取代原先存在的cDNA链。之后重复这个过程，RNase H再次切割RNA部分，让cDNA的合成重新进入下一个循环。就这样，SPIA DNA/RNA 引物结合、DNA复制、链替换和RNA切割循环进行，快速积累了大量的单链cDNA，而它们的序列都可以与原始的RNA互补。如果以5ng 总RNA作为起始材料，RNA平均扩增了1500倍。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

该试剂盒的优势：
◆ 快速有效地制备1500倍扩增的cDNA，时间只需4小时。
◆ 通过独特的Ribo-SPIA等温、线性扩增方法将灵敏度和重复性最大化，保持原有RNA样品中的相对丰度。
◆ 产生高质量的cDNA，能立即用于任何定量PCR系统。
◆ 步骤简单方便，节省时间，无需中间或最后的纯化步骤。

如果你想了解这个试剂盒的更多信息，请访问：https://www.roche-applied-science.com/servlet/RCProductDisplay?storeId=10202&catalogId=10202&langId=-1&countryId=us&forCountryId=us&productId=3.5.8.1.2.2。

（生物通 余亮）