iFOLD助你轻松完成蛋白复性[新品推荐]

【字体: 时间:2008年11月04日 来源:生物通

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用E.coli来表达蛋白,得到包涵体的概率相当大。虽说包涵体易于纯化,而且还能对付蛋白酶的袭击,但是,蛋白的复性也是一项相当艰巨而漫长的任务。继早期的iFOLD 1和2,Novagen推出了第三套iFOLD蛋白复性系统,其中主要的复性添加剂FoldACE试剂,能显著增强某些蛋白的折叠效率。不信,你试试?

蛋白终于表达出来了,不过是包涵体,真是喜忧掺半。虽说蛋白的复性还不是mission impossible,却也是一项相当艰巨而漫长的任务。与蛋白结晶类似,并没有放之四海而皆准的通用法则,每个蛋白的复性条件可能皆不相同。我们只有不断地尝试,才有可能获得最佳的结果。话虽说得轻巧,实验的艰辛和痛苦却不是人人都能体会的。

所幸现在有一些商业化的蛋白复性产品,能帮助我们筛选各种各样的复性条件。原核表达的金字招牌Novagen公司就曾推出了iFOLD 蛋白复性系统1和2。它们的缓冲液成分是根据Refold数据库(http://refold.med.monash.edu.au/)中蛋白复性的成功数据来确定的。这两个系统囊括了近两百种不同的复性条件,覆盖了一系列缓冲液、盐和添加剂,包括氧化还原伴侣、精氨酸、甘油、环式糊精、离液盐、乙二醇等,能高通量快速筛选复性条件。

最近,iFOLD蛋白复性系统又有了续集——iFOLD 3闪亮登场。与它的前辈类似,iFOLD 3也是以96孔板的形式筛选复性条件,不过它采用了一套全新的化学试剂—FoldACE—作为主要的复性添加剂。

这个FoldACE试剂是什么来头?有什么好处呢?它是从一个能增加蛋白回收率的化学试剂库中筛选出来的。FoldACE试剂共有五种,每一种都是水溶性的有机盐,分子量小于500 Da。它们不是去污剂,也不会形成胶束。在蛋白复性之后,FoldACE试剂可以通过金属螯合亲和层析或分子筛的方法有效去除,透析或超滤也可以。实验表明,它们能显著增强某些蛋白的折叠效率。

除了FoldACE试剂,iFOLD 3系统复性缓冲液的pH缓冲液成分也是五选一,分别是Bis-Tris、MOPS、HEPES、EPPS和TAPS。孔中还包含了还原剂(TCEP)或谷胱甘肽氧化还原缓冲液。iFOLD 3能根据不同的缓冲液、pH值、氧化还原剂和FoldACE试剂的组合,筛选一个蛋白的96种复性条件(91个实验孔和5个对照孔)。

筛选流程如下:

起始物质:包含目标蛋白的细胞 → 收集细胞 → 超声裂解细胞,并加入Lysonase生物处理试剂 → 离心收集包涵体 → 用Triton X-100洗涤包涵体 → 用盐酸胍变性包涵体 → 用iFOLD 3平板快速复性目标蛋白 → 用D-Tube96 透析器透析缓冲液 → 分析复性蛋白

如果你的蛋白用iFOLD 1或2就能复性,恭喜你。如果它们都无能为力,那就试一试iFOLD 3吧,全新的FoldACE试剂说不定能带来意想不到的效果。

(生物通 余亮)

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