自动化筛选最高表达量的细胞[新品推荐]

【字体: 时间:2008年12月17日 来源:生物通

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  对于表达蛋白和抗体的研究人员而言,最梦寐以求的事莫过于筛选到一株高表达的细胞。可这个过程往往耗费大量的时间和精力,结果还未必满意。ClonePix FL是迄今唯一能快速筛选哺乳动物细胞克隆的全自动化系统。它彻底变革了细胞筛选过程,能够从上千个克隆中自动挑选蛋白表达量或抗体分泌量最高的细胞克隆,时间只需26天,手工时间只需要8小时。

对于表达蛋白和抗体的研究人员而言,最梦寐以求的事莫过于筛选到一株高表达的细胞。可是我们这等凡人却没有这样的慧眼,能一眼挑出最具经济价值的细胞。通常是花了几个月的时间,筋疲力尽,效果还未必满意。有没有一些工具让我们从繁重的体力劳动中解脱出来呢?答案当然是肯定的。

也许你还不知道,世界上首个哺乳动物细胞筛选仪早在2003年就已经诞生了。它的东家是英国的Genetix公司。没听过它的大名不要紧,我给你介绍一下它的威水史。Genetix是第一家商业化384孔板的公司,如今他家的384孔板已经成为行业标准。Genetix还为人类基因组计划立下汗马功劳,当时多个主要实验室都采用了他家的高通量菌落挑选系统。Genetix是第一家也是世界上最好的生产全自动细胞株筛选仪器的厂家。赫赫有名的大药厂,如葛兰素史克,诺华,罗氏,诺和诺德以及中国的药明康德都采用了他家的ClonePix FL系统,来快速筛选哺乳动物克隆。

ClonePix FL是迄今唯一能快速筛选哺乳动物细胞克隆的全自动化系统。它彻底变革了细胞筛选过程,能够从上千个克隆中自动挑选蛋白表达量或抗体分泌量最高的细胞克隆,时间只需26天,手工时间只需要8小时。而传统的有限稀释分析需要2个月才能完成。ClonePix FL不仅加快了研究进程,还大幅节约了研究经费。挑选出来的细胞株不仅高产,且生产稳定,经济价值潜力无限。

你一定很好奇它的原理是什么,听我慢慢道来。ClonePix FL的秘密武器就在于半固体的培养基CloneMedia和特异的荧光检测试剂CloneDetect。细胞接种在含半固体培养基的6孔板上,培养4-10天。为什么用半固体培养基呢?因为它能将细胞固定,让它们生长并自由分裂形成不连续的克隆。另外,它还像孙悟空在地上画的圈一样,能将分泌的蛋白局限在分泌克隆的周围。培养基中荧光标记的检测试剂CloneDetect则能够检测到分泌在培养基中的蛋白或抗体。如果你的蛋白不分泌,那也没关系,只要在上面加个荧光标签如GFP,在细胞内就能直接观察到。

ClonePix FL强大的成像和软件分析能力能平行比较数千个哺乳动物细胞的蛋白分泌量。系统捕捉一系列高分辨率的白光和荧光图像,绘制出所有克隆及其分泌水平的二维图像。随后,软件会确定最高产的菌落,并挑选出来,以备二次筛选。

自动筛选哺乳动物细胞的流程:
将细胞铺在含半固体培养基的8×6孔板上。12天后,ClonePix FL筛选约4000个克隆,从中挑选出表达量最高的2-5%的克隆,培养1星期。这时你有两个选择,一是将这些克隆再接种到半固体培养基中,用ClonePix FL进行稳定性筛选;二是转移到24孔板中,扩大培养以备二次筛选。

ClonePix FL的应用领域非常广泛,从挑选杂交瘤、干细胞,到筛选高表达细胞、病毒斑,它样样拿手。以下是它的应用范例:

一)挑选表达针对特定抗原抗体的杂交瘤
1、ClonePix FL 自动筛选和挑取杂交瘤;
2、只挑取分泌抗原特异性IgG的克隆;
3、不再需要后续的大量ELISA筛选工作;
4 、适用的抗原范围广,从160kD 多聚体蛋白到 2.6kD 磷酸肽;
5、 所需要的时间短: 7-10 days to isolate HAT-selected clones of 100-500 cells。

二)根据产量筛选高表达单克隆抗体的细胞株
1、ClonePix FL自动挑取表达量高的“高价值”细胞株
2、不再需要复杂的检测和亚克隆步骤
3、无血清和有血清培养系统都适用
4、需要的时间短: 10-14 days to isolate cells for expansion

三)挑选小鼠干细胞
1、ClonePix FL自动筛选和收集小鼠胚胎干细胞 (mES)
2、mES 细胞在半固体培养基中培养,防止细胞分化和方便挑取
3、ClonePix FL能够发现和选择未分化的克隆

四)筛选生产稳定的细胞株
五)筛选分泌重组蛋白的高表达细胞克隆
六)根据细胞表面标志表达筛选克隆
七)根据细胞内报告基因的表达筛选克隆 (e.g. GFP)
八)杆状病毒蛋白表达系统,自动挑取琼脂糖培养基上形成的病毒斑。

如需ClonePix FL的详细资料,请联系基因有限公司(021-64951899-229 或 matthew_wxb@genecompany.com

(生物通 余亮)

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