2008新品回顾之小分子RNA篇[选购宝典]

在小分子RNA领域，今年有什么不一样的产品上市呢？无需转染的Accell siRNA无疑是最具突破性的产品。SOLiD系统又为小分子RNA的研究提供了新思路。芯片等产品也在不断更新，ABI推出的TaqMan MicroRNA Array以芯片的形式集合了高通量的miRNA定量研究，也是一大创新。

生物通编者按：每一年，生命科学领域都迸发出许多创新的闪光点。技术的创新正推动生命科学飞速地发展；而创新的产品也在争相亮相。在即将过去的2008年，有哪些创新的技术让你印象深刻，又有哪些创新的产品让你受益无穷？在2008年末，生物通推出“2008生命科学十大创新产品评选”活动。通过这次活动，我们将盘点出2007-2008年对生命科学领域影响最大的新产品，让更多的人了解科学发展的新方向，也早日享受到科技创新带来的成果。

小分子RNA近年来一直很红，从siRNA、shRNA到如今的miRNA。miRNA分子虽然小，却在体内起着不可估量的作用。单单一个miRNA，就有可能调控了数百个基因的表达。在癌症中，它们也同时充当着“推手”和“打手”的双重作用。无怪乎目前众多的研究纷纷集中在miRNA，而首个miRNA药物也在今年进入临床试验，暗示其前途无量。RNAi技术也仍是研究基因功能的利器，屡现突破。
研究的热点自然是新品不断。下面生物通就来盘点一下在小分子RNA领域有什么新货上市。

在RNAi领域，Accell siRNA的上市，可谓掀起了RNA干扰领域的新革命。Dharmacon公司推出的Accell siRNA试剂，采用特殊的化学修饰，不需要任何传统的转染介质（比如转染试剂、病毒载体和电转等）就能被直接吸收进入细胞。众多公认的难转染的细胞（如：原代培养细胞、悬浮细胞和神经元细胞等）全都不在话下。Accell siRNA首次克服了由于细胞转染问题所带来的基因沉默效率不佳的障碍，大大加速了实验进程。如此创新的产品，当然成为十大创新产品的候选。

ABI公司的SOLiD系统也是候选产品之一，不过它可不仅仅是测序仪，还是小分子RNA研究的新武器。SOLiD系统和SOLiD Small RNA Expression Kit结合，能在无需预先知道序列信息的情况下高通量地发现新的RNA分子。这个新方案有望显著地提高研究人员鉴别小分子RNA的能力，将过去不可能完成的实验变为可能。目前已发现的microRNAs还非常有限，SOLiD可在不知道目标分子DNA序列的情况下进行检测和定量小的RNA分子，而样品制备工作从常规方法的四天缩短为仅需一天，是分析在生物样品中表达的已知和未知miRNA及其它小分子RNAs的有力工具。

目前，芯片仍是高通量分析miRNA的首选。Sanger microRNA数据库(miRBase) 12.0版于2008年9月1日发布，最新版本报道了8273条成熟microRNA序列，新增2062条，是史上规模最大的一次版本更新。LC Sciences公司（联川生物）专利的微流体芯片技术保证了芯片探针随Sanger miRBase数据库实时更新。于是，它在9月份全球首家推出最新Sanger 12.0版microRNA探针信息，其标准microRNA微阵列芯片可对最新版数据库报道的包括人、大鼠、小鼠、斑马鱼、鸡、猪、水稻、玉米、拟南芥、病毒等在内的所有单个物种或是同类物种组，如哺乳动物、植物等的microRNA进行检测，并提供完整的数据分析。

同样是微流体芯片技术，ABI的TaqMan MicroRNA Array却和常规芯片截然不同，它更像是TaqMan MicroRNA Assay的芯片集成形式----通过对分析方法的创新改造，将TaqMan Assay和实时定量PCR的特异性、灵敏度和重复性金标准引入到miRNA的检测和定量中，特别适合人、大鼠和小鼠的miRNA图谱分析。原理其实很简单，就是384个定量PCR反应在一块微流量板上进行。每个阵列的包含最多381个独特的TaqMan MicroRNA Assays，有效缩短了准备时间，并减少实验的不确定性。用Megaplex RT Primers反转录miRNA靶点及用Megaplex PreAmp Primers预扩增之后，TaqMan Universal PCR Master Mix可与每个反应简单混合，并移至TaqMan Array的八个上样口中之一，一个工作日内就能产生覆盖Sanger miRBase的综合数据集。与芯片相比，它的上样量仅为百分之一，即使1ng的的总RNA，也能产生综合的表达图谱。这种打破常规的产品，无疑也是十大创新产品评选的入围作品。

在小分子RNA的制备方面，Roche也推出了多面手——High Pure miRNA Isolation Kit。它不仅能从细胞、动植物组织中提取miRNA，还能从FFPE样品中提取。它适用的FFPE样品大小为5-10um（1cm×1cm），先用二甲苯脱蜡，乙醇洗涤之后再用裂解液、SDS和蛋白酶K处理，后面的流程就与普通的组织一样了。除去脱蜡和蛋白酶K这些比较繁琐耗时的步骤之外，其他步骤只需要30分钟。

另外，RNA领域最出众的公司Ambion推出了microRNA研究指南。从microRNA的定义和生成，到纯化和富集，检测和定量，功能分析，还有miRNA表达载体和前体分子以及阻遏物，转染等等，囊括miRNA研究的方方面面。欢迎点击下载。
（生物通 薄荷）