[新品推荐]DNAZyme开启定量PCR的新篇章

    极具创新精神的Clontech公司一向是我非常欣赏的厂家，只因为他家的产品设计往往隐藏了许多令人惊喜的、独到的创新之处－－从早些年的SMART RACE技术，多种多样的预制杂交膜，酵母双杂交系统，到后来的Infusion PCR产物克隆试剂盒，细节设计之巧妙令人叫绝。所以Clontech也是美国研发领域R&D 100金奖的常客。对于Clontech推出的新产品，我的期望值一向都很高。

    在定量PCR的领域里，荧光染料法SYBR Green和Taqman探针法是使用得最广泛的方法，可谓是定量PCR的两大“金标准”。市面上绝大多数的定量PCR检测试剂盒大都是采用这两种原理。定量PCR的原理在生物通龙虎榜中的定量PCR仪选择宝典之原理篇有很详细的介绍，我们在这里不再重复。这一次Clontech推出的定量PCR检测试剂盒QZyme系列难道有会有什么惊喜吗？

    果然。同样是qPCR检测，QZyme的原理显然不同。QZyme的技术核心是DNAzyme，这个单词不同于DNA酶，是一段具有酶切活力的寡核苷酸序列，能够在特定核酸的磷酸骨架上切开核酸。Clontech的这段DNAzyme具有一段催化活性区(Catalytic domain,C)，两侧是底物识别区(R1 & R2)。DNAzyme遵守碱基配对原则，必须与底物结合后才能正确切割核酸底物。Clontech巧妙地将这个DNAzyme应用到qPCR中。

    DNAzyme特异的荧光底物：DNAzyme切割的特定序列（CS）两端围绕底物识别区(R1 & R2)，底物两端分别连有荧光素FAM，和Black Hole Quencher dye(BHQ)，由于二者距离接近，BHQ淬灭FAM的荧光，由于本身不发光使得本底更低。

    活性的DNAzyme：在一对基因特异性引物中，5'端引物外侧连接了反义的(antisence)、没有活性的DNAzyme，在扩增的过程中，合成的第二链（正义链）就形成有活性的DNAzyme。

    将这个DNAzyme特异的荧光底物加入反应体系中，有活性的DNAzyme就会识别并切割底物，使得FAM和BHQ分离，因而FAM激发光可以被检测到。随着扩增的进行，带有DNAzyme活性的正义链不断累积，释放的荧光信号随之线性累积，间接指示合成的DNA拷贝数。

    这个方法较之传统方法的优点在于：

1.灵敏度高，检测线性范围宽－－从少至3拷贝，多到1,000,000拷贝，跨越5个以上的对数级。
2.反应体系的建立象荧光染料法一样简单，无需优化，因为参照是一样的，和扩增模板的种类无关。反应体系不受模板复杂性的影响，可以是单一的cDNA，或者是复杂的全cDNA，或者文库。同时又可以避免非特异双链DNA的干扰。
3.由于可以设计不同的DNAZyme和特异的识别底物，因而可以在同一体系中进行多重扩增。
4.独立开放的体系，适用于任何一种定量PCR仪。

    这个新的定量PCR方法为定量PCR技术填上了新的篇章，兼有荧光染料法的简单易行和探针法的灵敏度高/检测范围宽，又避免了这两种方法的一些局限性。虽然由于底物和探针自备的困难，目前只能购买120多种现成的定量PCR检测试剂盒，但是这种巧妙的构思和勇敢的创新，却是推动技术不断进步的最宝贵的动力。（吴畏－－如果觉得这篇文章对你可能有点用，请尊重我的劳动和付出，本文属生物通原创作品版权所有，禁止抄袭，谢绝任何其他网站任何目的任何形式转载改编和引用。如果你觉得它没什么价值，那就更不值得你费力搬咯。）