转染新势力：Nucleofector核转染技术[新品推荐]

生物通 | 新技术专栏

【字体：大中小】 时间：2008年05月26日 来源：生物通

编辑推荐：

你是不是还在为转染发愁？

转染效率一直不理想，按照说明书优化了N次，Troubleshooting看了又看，转染效率还是那么低，发绿光的细胞还是像星星之火一样。

好不容易转染进去了，可是转染试剂毒性太大，细胞死大半了。唉，转了等于没转。

换个病毒的方法吧，太麻烦，从构建质粒到生产病毒粒子，花了一个多月，而病毒粒子的滴度还是太低，感染不上，白搭。

现在，有了德国Amaxa公司的Nucleofector™ 核转染技术，你终于不用再发愁了。

Nucleofector™ 技术是Amaxa公司的专利创新技术，它综合应用传统的电穿孔技术及细胞特异性的细胞核转染液，通过调整优化电转参数（内存转染程序），直接把外源基因导入原代细胞和传代细胞的细胞核中。它不同于传统的电穿孔仪，因为它可以把外源基因直接导入核中，而且细胞存活率远远高于电穿孔仪。

Nucleofector™ 技术优势：

· 不依赖细胞的有丝分裂，适用于悬浮细胞、原代细胞等难转染细胞（表1）；

在某些细胞中Nucleofector的转染效率可以达到90%，与病毒感染同样有效

· 高转染效率，直接将外源基因转入核内；

Nucleofector直接将DNA运送到细胞核中，因此，基因表达就可以立即开始，数小时内就可以完成转染和分析的全过程，对于细胞系来说2-6小时就可以分析，对于原代细胞则需要4-16小时

· 可转染DNA、RNA或siRNA；

应用Nucleofector技术，各种各样的核酸包括DNA、RNA或DNA/siRNA寡核苷酸都可以被转染，当然，也可以共转染

· 优化好的操作步骤，快速方便；

Amaxa与ATCC进行合作，由ATCC提供细胞，Amaxa开发和优化针对每种细胞的特异转染步骤，让研究者能够节省时间，再也不需要耗时和收效甚微的反复优化

· 内存优化程序不断免费升级；

客户可以在Amaxa公司的网站上免费升级软件

· 全球共享的细胞转染数据库不断扩大

目前在Amaxa网站Cell Database中已有633种细胞的优化转染数据，且还在不断更新

细胞	转染效率	细胞	转染效率
Human B cells	36%	Human keratinocytes	46%
Human MSC	47%	Human dendritic cells	49%
HUVEC	50%	HMVEC-L	52%
Rat neurons, hippocampal	54%	HCAEC	57%
Mouse neurons	58%	Rat neurons, cortical	59%
Human chondrocytes	65%	Human T cells	66%
Human AoSMC	68%	NHEM-Neo	70%
CD34+	71%	Human dermal fibroblasts	89%

表1 原代细胞的转染效率

Nucleofector™ 技术有两个组成部分：

Nucleofector™ 装置

Nucleofector装置具有独特的电参数，与其他电转仪都不同。针对每种细胞设计好优化的转染程序，且编在Nucleofector的应用程序中。因此使用者无需再对参数进行优化。而且这个装置体积小巧，只有2.6kg，可以放在超净台内，保证细胞操作的无菌环境。

Nucleofector™ 试剂盒

Nucleofector试剂盒包含两个溶液：Nucleofector溶液和添加剂。两者都是针对每个细胞类型来特异开发的。它们在核转染过程中提供了细胞友好的环境，支持DNA直接到达细胞核。Nucleofector溶液只与Nucleofector装置共同使用时，才能发挥作用。

为了实现高通量的转染，Amaxa新开发了适用96孔板的Nucleofector^R 96-well shuttle核转染系统和96-well Nucleofector^R 试剂盒。

完整的Nucleofector^R 96-well shuttle转染系统由三部分组成：Nucleofector II 核转染仪，96-well Shuttle，以及含配套软件的电脑。96-well Shuttle由Nucleofector II驱动，可以将DNA直接导入细胞核中，效率高达95%，且不分裂的原代细胞（静息T细胞或神经细胞）都能被有效转染。另一方面，也可以将siRNA导入细胞质中，效率高达99%。Nucleofector II 转染仪的客户, 只需添加96-well Shuttle和计算机即可升级为高通量的核转染平台。