新品推荐:纯化MBP-和Strep(II)-标签融合蛋白的高效色谱填料

【字体: 时间:2008年06月13日 来源:生物通

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不同的蛋白质特性千变万化,使得蛋白质研究远远比核酸研究更复杂。在重组蛋白纯化的过程中,为简化重组蛋白的纯化步骤,研究者常常利用与目标蛋白融合表达的各种亲和标签,通过一步法亲和纯化的方法快速获得自己的目的蛋白。其中,GST,MBP(麦芽糖结合蛋白),6×His•Tag是最为人熟悉的蛋白融合表达标签。StrepTag(II) 则是新型的小分子蛋白融合表达标签,个子小(8个氨基酸)、对蛋白活性影响较小、亲和纯化方便。当选择这类融合表达标签进行融合表达,就需要选择合适的亲和纯化填料。

    MBP标签分子量较大,有助于提高融合表达产物的可溶性,特别适合希望提高产物溶解性的融合表达,或者是因为分子量小容易被降解而难以稳定纯化的分子。

 

    StrepTag(II) 8氨基酸小标签是不同于6xHis Taq一个新选择。我们早已熟知biotin和streptavidin之间能够高度特异的结合,这种特异性结合早已广泛用于免疫或者非放标记反应中。这种8个氨基酸的小标签Strep•Tag(II)正好能特异的结合到streptavidin上。streptavidin与小标签的结合位点经过特殊耦合改造成为StrepTactin,与Strep•Tag II融合标签的结合力超出普通streptavidin约100倍,确保了其最优的结合特性。当表达产物经过Strep•Tactin亲和纯化柱时,融合表达Strep•Tag II的融合蛋白高特异地结合在亲和柱上,经过反复洗涤杂蛋白后,可以用一种生物素的类似物——2.5 mM脱硫生物素,在温和的PBS或者其他生理条件缓冲系统就能一步彻底洗脱目的蛋白,温和条件有助于保持蛋白的活性。StrepTag(II)个子小(8个氨基酸)、对蛋白活性影响较小、亲和纯化方便。

 

    当选择这类融合表达标签进行融合表达,就需要选择合适的亲和纯化填料。

    Dextrin Sepharose™ High Performance 是一种高效色谱填料,有25ml 和100 ml 两种专门针对实验室使用的包装,可快速、方便的用于亲合纯化带有麦芽糖结合蛋白标签(MBP-tag)的融合蛋白。

 

     StrepTactin™ Sepharose High Performance1提供了通过亲和层析的方法纯化Strep ( II )标记的重组蛋白。有 10 和 50 ml 两种针对实验室使用的包装,用于高效和批量纯化 Strep(II)-标签融合蛋白。牢固且又稳定的琼脂糖填料基架可带来高分辨率,尖锐集中的洗脱峰和高的重现性。纯化在物理条件下进行,且温和的洗脱条件确保了目标蛋白的活性。由于结合的高度专一性,只需一步洗脱即可达到高纯度。。

     这两种亲合色谱填料中的高效颗粒极为细腻(直径34µm),能提供高结合载量和尖锐的浓缩洗脱峰,并最大程度的降低后续的目标蛋白浓缩时间。

Dextrin Sepharose High Performance 和 StrepTactin High Performance media的优势:

  • 在提高纯化量时,这两种填料非常容易被填装到实验室用的层析柱中,比如Tricorn™和XK等
  • 允许在生理条件下进行纯化和温和洗脱,保持蛋白活性和空间结构
  • 一步法快速亲和纯化,获得高纯度目的蛋白
  • 尖锐且非常集中的洗脱峰温和的洗脱条件保护了目标蛋白的活性
  • 替代金属离子螯和层析方法,避免重金属离子对蛋白的干扰
  • 可以配合使用常见的水性缓冲液,用0.5 M NaOH重新配制溶液也非常简便。兼容广泛的还原剂,去垢剂,变形剂和其他添加剂,耐NaOH的清洗
  • 还有1和5 ml两种已经包装填料的MBPTrap™ HP 和 StrepTrap™ HP 色谱柱,可供方便、快速、可靠的分别纯化 MBP-和Strep(II)-标签融合蛋白之用
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