从水样中分离宏基因组DNA的新方法

Epicentre的宏基因组DNA分离试剂盒，为宏基因组文库制备提供了一种简单的新方法。

　　

Epicentre最近推出了宏基因组DNA分离试剂盒（Metagenomic DNA Isolation Kit for Water），能从水样中分离已随机剪切的，可直接用于fosmid克隆的DNA片段。

利用fosmid克隆系统的宏基因组文库构建是探索环境微生物的理想选择。Fosmid克隆系统通常使用随机剪切的DNA，这种方法与限制性酶切相比序列覆盖度更好。但传统的文库制备方法步骤繁多，需要琼脂糖凝胶块、随机剪切、末端修复，还要通过脉冲场电泳（PFGE）来进行大小选择，然后再克隆到fosmid载体上、包装、铺板（如下图中的传统方法），整个过程大约需要一周的时间。在宏基因组fosmid文库构建过程中，关键是1) 必须得到足够量的高分子量DNA；2) 通过机械剪切及脉冲场凝胶电泳产生40kb左右的片段。然而这个过程通常需要3天，并导致大量样品损失。

Epicentre的新试剂盒则提供了一种全新的方法（如下图中的新方法）。它能从水样中的培养或未培养微生物（包括革兰氏阳性菌）中提取出40kb大小的DNA。提取的DNA可立即进行末端修复，并在乙醇沉淀洗涤后克隆到Epicentre的pCC1FOS载体上。整个过程两天就能完成。

优势：
• 无需化学剪切、琼脂糖块或大小选择
• 无需纯化柱或酚/氯仿提取
• 产量更高，从低丰度的微生物中回收DNA的概率更大
• Fosmid载体与DNA的克隆只需要90分钟

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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