牛年说New：QIAGEN质粒纯化 不止是经典[选购宝典]

一提起核酸纯化，大家脑子里肯定都会闪过QIAGEN。这个在当前核酸纯化领域里公认最牛的品牌，一直是大家心目中的“金标准”，多年来始终牢牢占据着欧美核酸纯化领域第一的市场份额。尽管如此，QIAGEN也没有固步自封，每年还是不断推陈出新，力求让质粒提取更贴心、更快、更轻松。现在就让我们来看看09年QIAGEN在质粒纯化上的新动向吧。

一提起核酸纯化，大家脑子里肯定都会闪过QIAGEN。这个在当前核酸纯化领域里公认最牛的品牌，凭借原创的技术专利，出色而稳定的产品质量，专业而体贴的产品划分，不断创新的精神，多年来一直稳稳占据欧美核酸纯化领域第一的市场份额。即便是在科研经费紧缺的中国，虽然进口的QIAGEN价格要明显高于国产同类仿制产品，但很多人还是会屯着几个QIAGEN的蓝盒子，在最最关键的实验中才使用，可见QIAGEN在大家心目中的“金标准”地位。让你在购买产品时很难把它忽略，就像我们在购买手机时，诺基亚终归还是要看看的。

QIAGEN为什么这么牛？首先是技术的原创性。早在1986年QIAGEN推出全球第一个基于阴离子交换树脂技术的质粒纯化试剂盒，上市23年来，QIAGEN Plasmid Kit 依然是QIAGEN最经典的产品，质粒纯化的Top 10地位从未动摇。1992年QIAGEN更推出了日后风靡全球的硅胶膜核酸纯化技术。借助小型台式离心机，只要15分钟即可获得高纯度的质粒。快速、稳定、质量高，无需经验和技术，QIAGEN Spin迅速成为最受欢迎的产品之一。如今，即便擅长于手工提取的实验室，大部分人再也不愿退回到手工提取的年代。毕竟试剂盒更快速简便，质量也更加稳定。

尽管QIAGEN雄踞核酸纯化领域榜首多年，QIAGEN的产品依然是100%德国原产，从未假手他人代工，哪怕这可能导致产品运输成本偏高。质量稳定可靠，有口皆碑，使得大部分同类产品纷纷以Q品牌作为“金标准”来对照----不过甭管谁家说明再精彩，至今未见谁能超越QIAGEN市场占有率第一的地位。当然QIAGEN也没有固步自封，尽管产品线已按不同需求进行了最全面的划分，QIAGEN每年还是能不断推陈出新，力求让质粒提取更贴心，更快，更轻松。这种创新能力，而不是模仿能力，恰恰是衡量一个品牌长青与活力的重要因素。

更快：09新动向

不断加速，用来描述当今的实验室竞争并不过分，如果你现在还觉得“要那么快干吗？”那你一定已经OUT出顶尖实验室的竞争了。更快、更多、更简便，本来就是所有实验人对实验的基本期盼。QIAGEN深明此道。

以转染级的QIAGEN Plasmid Kit 为例，在产量和纯度方面都让人相当满意，除了速度。虽然比2次氯化铯超速离心要快得多，手工操作也不复杂，可整个操作流程仍约耗费2-3个小时。QIAGEN在2009年最新推出超快速的转染级质粒纯化试剂盒——QIAGEN Plasmid plus Kit，20分钟即可纯化24个样本（Midi或者Maxi），是市面上最快的转染级别中到大型质粒纯化试剂盒。相对于QIAGEN Plasmid Maxi Kit，纯化速度一下子就提高了8倍，可实现24个样品并行纯化，而得到的质粒纯度相当，内毒素水平低至0.1-1 EU/μgDNA。究竟是什么改进使得转染级质粒纯化实现又快又多又高通量呢？

QIAGEN Plasmid plus Kit的创新在于更快速的硅胶膜纯化方法，在碱裂解步骤后，利用QIAfilter 无须离心即可过滤获得澄清裂解液，利用真空抽滤替代离心进行DNA 的结合和洗涤步骤，最终获得转染级别的高纯质粒DNA。

传统的硅胶膜纯化方法胜在速度快，但纯度不及阴离子交换技术高，那么QIAGEN Plasmid plus Kit 获得高纯质粒的法宝是什么呢？生物通小编剖析了整个纯化过程，发现有几个与众不同之处。1. 独特的QIAGEN Plasmid Plus离心柱，性能与阴离子交换柱相当。2. 增加内毒素去除溶液（ETR buffer for Midi/Maxi kit，CPW buffer for Mega/Giga Kit）；3. 额外增加了一步清洗步骤；4. 增加LyseBlue可直观监测裂解效率。别小看最后一点，作为手工大提质粒熟手工人级别的生物通小编，深知质粒大提的得率往往不如小提，技术难点之一就在于细胞裂解是否充分、变性和复性是否彻底，对于那些“难搞”的菌株如HB101之类的尤其如此。LyseBlue的作用类似于pH值指示剂，可以直观地看到裂解效果和中和效果。溶液I悬浮细菌后加入溶液II就会变蓝，如果你看到溶液中局部呈现白色，就需要再振摇直到全部变蓝，加入溶液III后蓝色又会褪去，如果还有蓝色痕迹，请继续振摇，直到全部无色。有了LyseBlue的提示，无需经验也不易犯错，实现质粒高产变得简单了。

说实话，提一次质粒花费不少，转染起来消耗又大，作为操作人员当然希望产量越高越好，QIAGEN Plasmid plus Midi/Maxi Kit 中提供了优化的高产量protocol，以较大的洗脱体积确保质粒DNA的产量更高（中提达到250 μg，大提达到1000 μg），满足你的更多需求。当然标准方法的洗脱体积相比同类产品来说是最小的，只需100-200ul，这使得产物浓度高，自然更方便后继使用。

比快更快

更多的质粒是用于PCR或酶切，虽然QIAprep Spin Miniprep Kit就已经足够好用了。可还能再快点吗？能。

QuickLyse Miniprep Kit顾名思义，就是快速裂解。这个试剂盒放弃了经典碱裂解的三步，而采用了酶解和渗透过程一步裂解细菌细胞，时间只需3分钟。这个过程本身并不比加溶液123快，关键快在可以直接得到澄清的裂解液，无需离心10分钟沉淀蛋白质和染色体，直接加到QuickLyse离心柱上进行清洗和洗脱。整个纯化过程只需9分钟就能从1.5 ml的菌液中获得1.5 μg的质粒DNA， 24个样品并行纯化也仅用22分钟，最大程度了减少手动操作时间。特别适合高拷贝质粒，制备得到的DNA 可用于测序、限制性酶切等。

还要再快点再轻松点吗？行呀。过去，载体酶切连接后筛选重组子是相当痛苦的。重组子少自然凄凉，多了也头疼----最终的目标载体往往用不上蓝白斑，何况蓝白斑也不那么靠谱，成百上千个克隆要培养，提质粒，还要酶切判断是否重组子以及片段插入方向是否正确。。。逐个培养实在太费功夫了，不得不自创点板直接快提质粒。。。以至于生物通小编一看到大型平板电泳槽就会条件反射地回忆起过去一行20多个样，一次4行上百个样排队电泳的大阵势。。。泪呀。。。还有cDNA文库筛选也一样可怕，如果要逐个扩大培养，逐个抽提质粒，那工作量可不是一般的大。QIAGEN 新出的PlasmidAmp Kit则让你从这种艰苦劳动中解放出来，这个方法跳出了单纯的核酸纯化的范围，而利用PCR替代细菌培养等等繁琐工作，直接从单菌落中扩增质粒DNA。虽说PCR直接检测重组子的方法早已有之，但过去方法算不上成熟稳定。PlasmidAmp用反向PCR来获得环状模板的线性拷贝。专利的引物能与质粒上的ColE1复制起点互补，因此适用于pUC19，pBR322等常见质粒。试剂盒内特殊的混合酶保证了扩增的保真度和产量，最长扩增片段可达9 kb。有Q家品牌保证，那就不必担心稳定性了，他家的验证工作可是非常非常严谨的。

如一些资深老用户所言，选择QIAGEN试剂盒最大的好处是可靠省心，尽管贵，但从未让人失望过。经过前几年代理价格战，QIAGEN直销等等变化，QIAGEN产品的价格也实惠了不少，遇上09年产品推广促销，可就是囤货的好时机啦。

（生物通 吴青 余亮）