少量RNA也能进行高通量的miRNA表达图谱分析[创新技巧]

比利时根特大学(Ghent University)医学遗传学中心Vandesompele和Speleman教授的实验室正致力于神经母细胞瘤的遗传基础研究。博士生Pieter Mestdagh正在研究miRNA在神经母细胞瘤发病机理中的作用。他和同事们最近开始使用美国应用生物系统公司的工具，对大量神经母细胞肿瘤样品中的几百个miRNA进行图谱分析[1]。

这项研究应用美国应用生物系统公司的Megaplex™ RT 引物及预扩增步骤，通过TaqMan®实时定量RT-PCR分析同时检测400多个miRNA的表达。Megaplex RT 引物是新型的茎环结构的反转录引物混合库，能简化单个实验中数百个miRNA靶点的图谱分析。Megaplex PreAmp 引物可显著增加低表达miRNA的检测能力，可实现单细胞（2 pg总RNA）样品中的miRNA定量。

这项研究显示预扩增的方法增加了miRNA检测的灵敏度，低至10 ng的RNA也能成功进行图谱分析。在预扩增步骤中，相对表达水平保持不变，而可检测的miNRA的数量增加。此外，这种方法还能重现以前发表的miRNA差异表达结果，并由此得到验证[2, 3]。

这些结果强调了Megaplex RT Primers和Megaplex PreAmp Primers可成功应用于从少量起始材料进行可靠而高通量的miRNA表达图谱分析上。这些工具能简化神经母细胞瘤中miRNA所扮演角色的研究。

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参考文献：

1. Mestdagh P, Fey T, Bernard N, Guenther S, Chen C, Speleman F, Vandesompele J (2008) High throughput stem-loop RT-PCR miRNA expression profiling using minute amounts of input RNA. Nucl Acids Res doi:10.1093/nar/gkn725.

2. Schulte JH, Horn S, Otto T, Samans B, Heukamp LC, Eilers UC, Krause M, Astrahantseff K, Klein-Hitpass L, Buettner R, Schramm A, Christiansen H, Eilers M, Eggert A, Berwanger B (2008). MYCN regulates oncogenic miRNAs in neuroblastoma. Int J Cancer 122(3):699-704.

3. Applied Biosystems Inc (2008) Your Data: Using miRNA Inhibitors to Study Neuroblastoma Tumor Pathogenesis. TechNotes 15(1):16-17.

神经母细胞瘤的遗传学
神经母细胞瘤是儿童颅外肿瘤的主要成因。MYCN癌基因调节了一系列miRNA，在一系列浸润性的神经母细胞肿瘤中扮演着重要角色。该实验室最近介绍了受MYCN调节的miRNA的致癌作用[3]。

Megaplex™ 引物混合库
Megaplex RT Primers是新型的茎环结构的反转录引物混合库，能简化单个实验中数百个miRNA靶点的图谱分析，减少反转录反应的数量，以及获得综合的miRNA表达谱所需的总RNA的量。

可选的Megaplex PreAmp Primers显著增加了低表达miRNA的检测能力，从而使少至1 ng的总RNA也能获得综合的miRNA表达图谱。

Megaplex Primer混合库既可与单个TaqMan® MicroRNA分析共同使用，也能与TaqMan MicroRNA Array一起进行理想的图谱分析流程。更多信息，请访问mirna.appliedbiosystems.com。