迅速实现基因沉默的新工具[新品推荐]

【字体: 时间:2009年06月02日 来源:生物通

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  Sigma-Aldrich公司近日在全球推出MISSION® esiRNA,一种基因特异的siRNA库,它为哺乳动物细胞中的RNAi筛选提供了一种强有力的方法。与传统的合成siRNA不同,esiRNA集合了数百个针对单个基因靶点的siRNA。这种新工具能避免鉴定有效siRNA的反复试验过程,迅速实现基因沉默,并确保脱靶效应最低。

Sigma-Aldrich公司近日在全球推出MISSION® esiRNA,一种基因特异的siRNA库,它为哺乳动物细胞中的RNAi筛选提供了一种强有力的方法。与传统的合成siRNA不同,esiRNA集合了数百个针对单个基因靶点的siRNA。这种新工具能避免鉴定有效siRNA的反复试验过程,迅速实现基因沉默,并确保脱靶效应最低。

此项技术与传统的单个siRNA介导的基因knockdown相比,优势相当明显。以前,我们需要反复试验,来鉴定出最有效的siRNA,现在有了这个siRNA的“超级库”,这一步都省了。此外,esiRNA还能确保最低的脱靶效应。esiRNA是由德国马普学会细胞生物学和遗传学(MPI-CBG)开发的。

MPI-CBG的课题组组长Frank Buchholz开创了esiRNA技术在RNAi筛选中的应用。他表示:“我们很高兴能与Sigma-Aldrich合作,让整个学术界都能享有esiRNA技术。10年前,esiRNA在美国旧金山加州大学的Mike Bishop实验室中发明。自此,它就成为我的研究重点。Sigma-Aldrich在RNAi方面的丰富经验和产品线是我们生产高效特异esiRNA的完美补充。”

哈佛大学医学院正在运用esiRNA来协助鉴定促使HIV增殖的人类基因。临床研究员Abraham Brass博士认为MISSION esiRNA的初步试验结果表明多个基因都能被非常有效地knockdown。哈佛医学院很快将会把此项技术整合到多项研究中。

esiRNA是由核酸内切酶制备的(下图)。首先用特异的引物扩增最佳的靶区域。序列经过验证后,利用RNA聚合酶产生300-600 bp基因特异的双链RNA,随后用核酸内切酶切割产生短的dsRNA。这些类似siRNA的分子经过纯化,就形成了siRNA库,它们靶定了单个基因的不同序列。


MISSION esiRNA具有下列优势:

  • 针对每个基因靶点的MISSION esiRNA超级库
  • 快速经济地完成初次筛选
  • 有效的基因沉默
  • esiRNA的knockdown效率高于70%
  • 脱靶效应更低
  • 大型RNAi筛选研究的费用更省

目前,MISSION esiRNA有以下几种规格,满足不同实验的需求:

  1. MISSION esiRNA人基因组规模库,覆盖12000多个基因靶点
  2. MISSION esiRNA人激酶库,覆盖500多个基因靶点
  3. 定制MISSION esiRNA库(20 ug),适于10到1000个基因靶点
  4. 单个MISSION esiRNA(20 ug或50 ug),适于1到10个基因靶点

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MISSION esiRNA的相关文献:

Theis, M. et al. Comparative profiling identifies C13orf3 as a component of the Ska complex required for mammalian cell division. EMBO J. Apr 23 (2009). [Epub ahead of print] Abstract

Ding, L. et al. A Genome-Scale RNAi Screen for Oct4 Modulators Defines a Role of the Paf1 Complex for Embryonic Stem Cell Identity. Cell Stem Cell. Apr (2009) [Epub ahead of print] Abstract

Kittler, R. et al. Genome-scale RNAi profiling of cell division in human tissue culture cells. Nat. Cell Biol. 9, 1401-12 (2007). Abstract

Kittler, R. et al. An endoribonuclease-prepared siRNA screen in human cells identifies genes essential for cell division. Nature 432, 1036-40 (2004). Abstract

(生物通 余亮)

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