全新MagNA Pure LC总核酸分离试剂盒-High Performance[新品推荐]

现在有许多用于核酸分离的试剂盒和方法。但是，其中很少能保证全自动的样品制备，同时保证最高回收率和灵敏度。因此罗氏诊断公司开发了全新的MagNA Pure LC总核酸分离试剂盒-High Performance。这个新试剂盒通过技术优化，保证了总病毒DNA和RNA从血浆、血清和全血中的极高回收率，从而适用于高灵敏度的病毒核酸检测。

Michael Kirchgesser*，Sabine Eppler，Christel Adem，Sabine Mitzel，Werner Malmberg，Claudia Kappelsberger，Louise Zieseniss，Peter Wenzig
Roche Applied Science，Penzberg，Germany
*通讯作者：[e-mail] 

前言
现在有许多用于核酸分离的——人工和自动——试剂盒和方法。但是，其中很少能保证全自动的样品制备，同时保证最高回收率和灵敏度。因此罗氏诊断公司开发了全新的MagNA Pure LC总核酸分离试剂盒-High Performance。这种试剂盒基于经典的磁珠分离技术，后者成功用于不同的MagNA Pure自动核酸分离纯化系统已有多年。这个新试剂盒通过技术优化，保证了总病毒DNA和RNA从血浆、血清和全血中的极高回收率，从而适用于高灵敏度的病毒核酸检测。此外，它使可处理的样品量范围达到100-1000μl。并且，如果需要的话，还有外部裂解方法可供选用，从而允许在MagNA Pure LC仪器之外进行病毒灭活。

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材料和方法
新试剂盒是用人EDTA血浆、枸橼酸盐血浆、血清和全血作为样品材料开发的。本研究中，在样品中添加不同量的DNA病毒（巨细胞病毒、EB病毒）和RNA病毒（甲型肝炎病毒、甲型流感病毒），并在MagNA Pure LC仪器及对照平台上进行处理。所有样品至少以4倍复制进行试验。 纯化核酸的洗脱体积为50或100μl。对上述4种病毒类型，采用参数特异的定量实时PCR和RT-PCR分析，在LightCycler®480实时荧光定量PCR系统上进行分析。用15μl各种预混液和5μl各种洗脱液建立扩增反应，并运行45个周期。

结果和讨论
所有试剂盒组成部分都进行了优化，对不同试剂组成进行了试验，更改了所有的处理步骤和反应条件以寻找最佳的总核酸（TNA）分离程序。新方法兼容MagNA Pure LC 1.0仪器和最新的MagNA Pure LC 2.0仪器。

灵敏度/阳性率
实验结果显示，达到最高的灵敏度需要非常充分的结合步骤，这就需要相对长的运行时间（32份样品需要180分钟）。这种“高灵敏度（总NA HS）方法”允许对于每次分离检测低于100个病毒拷贝数（用200μl样品量），理论上相当于每次（RT-）PCR可检测低于10个拷贝。这种方法在我们的灵敏度试验中显示良好的结果（表1），与当前实验室中最好的对照系统相似，甚至更好。

但对于许多应用，这种最高灵敏度不是必需的，因此我们也开发了一种耗时较短的“高性能（总NA HP）方法”，即灵敏度稍低，但速度快得多（32份样品需90分钟）。

表1：新的“总NA HS”和“总NA HP”方法以及对照系统之一的阳性率。对于阳性率试验，将大约为检测极限的病毒量加入24份样品。 在核酸分离和检测后，计算PCR阳性洗脱液（“阳性”）的百分比。 括号中是每份样品中加入的大约病毒拷贝数，注意病毒滴度的测定通常具有一定不精确性。

分离方法	HAV	Inf.A	EBV	CMV
	(66 个拷贝)	(50 个拷贝)	(200 个拷贝)	(100 个拷贝)
“总NA HS 200”	100 %	100 %	79.2 %	91.7 %
“总NA HP 200”	100 %	100 %	33.3 %	83.3 %
对照方法B	91.7 %	91.7 %	62.5 %	91.7 %

回收率
为了比较新试剂盒与当前最佳对照方法的回收率，用大约每份样品104个拷贝的“中等”病毒浓度对新的“总NA HP”、“总NA HS”方法，以及对照方法B进行并行运行。结果与阳性率实验相似：新的试剂盒和方法显示了卓越的性能（图1），尤其总NA HS方法与当前实验室中最好的对照系统相似甚至更好。

图1：不同样品类型的病毒核酸回收率。 举例显示了HAV和EBV的结果。新的“总NA HS”和“总NA HP”方法的分离效率与最佳对照方法相似。柱状图显示了通过定量（RT-）PCR计算的分离拷贝数差异。每个柱形显示了4倍复制的平均值。在所有情况下，“总NA HS”方法或与对照方法处于相同范围，或显著优于对照方法。

交叉污染试验
用16份阳性和16份阴性血浆样品，排列成棋盘图形，对新的试剂和方法进行交叉污染检查。阳性样品中加入含Parvo B19特异性序列的质粒，最终浓度为1x107和2.5x108个质粒/ml。在MagNA Pure LC 1.0仪器和MagNA Pure LC 2.0仪器上进行分离。用两种MagNA Pure LC仪器上的自动分析设置对洗脱液进行分析，然后在LightCycler® 480系统上进行敏感性Parvo B19特异性PCR试验，均未发现交叉污染。

大样品量方法
新试剂盒能处理100、200、500和1，000μl的样品量。试剂量允许对100或200μl样品进行288次分离，500μl样品进行192次分离，1,000μl样品进行96次分离。500和1，000μl样品的方法只适用于血浆或血清，而不适用于全血，因为血细胞中含有大量的基因组DNA。

结论
本研究显示，全新的MagNA Pure LC总核酸分离试剂盒- High Performance允许从多种样品材料中对总病毒核酸进行全自动高效分离，具有高回收率和灵敏度。用户可以根据特殊需要在几个不同方法间作出选择。此外，灵活的试剂概念可以处理大范围的样品量，因此这种新试剂盒的上市将成为感染性疾病自动分析环节中的有效工具。

订购信息

产品 新！	包装大小	目录号
MagNA Pure LC总核酸分离试剂盒-High Performance	1 kit	05323378001