元月号冷泉港实验手册讲述FISH和ELISPOT[创新技巧]

在元月号的冷泉港实验手册（Cold Spring Harbor Protocols）中，德国亥姆霍茨环境研究中心的Annelie Wendeberg发表了一篇protocol，讲述的是用荧光原位杂交（FISH）来鉴定环境微生物。加拿大麦吉尔大学健康中心的Nicole Bernard及其同事则发表了一篇关于双色ELISPOT分析的protocol。

宏基因组学（metagenomics）正在快速发展。克隆和测序技术的改进让研究人员更好地了解环境样品中的微生物，并对物种相互作用和群落动态有了新的认识。这些样品中微生物的鉴定对于研究结果的阐释极其重要。在元月号的冷泉港实验手册（Cold Spring Harbor Protocols）中，德国亥姆霍茨环境研究中心的Annelie Wendeberg发表了一篇protocol，讲述的是用荧光原位杂交（FISH）来鉴定环境微生物。

在此方法中，研究人员通过FISH和靶定rRNA的寡核苷酸探针，以及催化报告基因沉淀（CARD）的信号扩增，对环境样品（比如水和沉积物）进行了系统发育鉴定。FISH探针上结合了辣根过氧化物酶。杂交之后，荧光标记酪胺盐的沉淀在靶细胞中产生了更高的信号强度。此步骤中描述了酪胺盐与不同荧光基团的定制标记，以及样品制备和各种微生物细胞壁的细胞通透策略。多色CARD-FISH能同时检测不同的系统发育组。文章如下：

Fluorescence In Situ Hybridization for the Identification of Environmental Microbes

酶联免疫斑点分析（ELISPOT）被很多人认为是检测胞内免疫应答的金标准。这种方法高度灵敏、能定量，使用简单，容易发展成高通量筛选。直到最近，ELISPOT分析也仅限于一个效应分子的鉴定。由于病原体特异的T细胞上IFN-γ和IL-2的维持与HIV感染后更有利的临床结果相关联，ELISPOT分析能够鉴定两种效应分子，对监测某些传染源的免疫应答很有帮助。

加拿大麦吉尔大学健康中心的Nicole Bernard及其同事发表了一篇关于双色ELISPOT分析的protocol，描述了在病毒肽段的刺激下，用ELISPOT分析同时检测IL-2和IFN-γ。文章如下：

Dual-Color ELISPOT Assay for the Simultaneous Detection of IL-2 and/or IFN-γ Secreting T Cells

以上这两篇protocol都是免费的，可点击文章标题查看原文。其它protocol涉及抗体、细胞生物学、遗传学、高通量分析、分子生物学等多个方面，不过要订阅后才能查看。（生物通 余亮）

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