12月冷泉港实验方案关注胚胎发育[创新技巧]

12月的冷泉港实验方案《Cold Spring Harbor Protocols》发布。按照惯例，每一期都会挑选两篇文章，供大家免费阅读。这一期的两篇文章都是与胚胎发育的观察有关，一个是早期的小鼠发育，另一个是线虫胚胎的观察。

 

Imaging Cell Movements in Egg-Cylinder Stage Mouse Embryos

 

观察哺乳动物的胚胎发育面临一个显而易见的问题：胚胎必须在子宫中发育。这就让它们很难像斑马鱼一样在显微镜下观察。研究人员开展了大量工作来开发胚胎培养技术，以便让小鼠胚胎在外部发育，这样成像技术才能够派上用场。

 

在本期CSH Protocols上，牛津大学的Shankar Srinivas介绍了一种方法，能够分离和培养卵圆柱期的小鼠胚胎，并在那些胚胎发育时进行延迟成像。作者认为，尽管光学显微镜能够追踪细胞运动，但转基因荧光小鼠让细胞运动的研究更轻松、信息量更大。

 

作者还提到，对于小鼠胚胎的成像，标准的宽视场落射荧光、激光扫描和转盘碟片共聚焦系统都适用，但每一个都有自己的优缺点。共聚焦显微镜与宽视场落射荧光显微镜相比，能带来更高质量的图像，但不够灵敏，因此对成像的胚胎有更多的光损害。不过，高度灵敏的激光扫描共聚焦显微镜（如蔡司710）在提供高质量图像的同时，光损害极少。

 

An Agar Mount for Observation of Caenorhabditis elegans Embryos

 

线虫是一种重要的模式生物。发育时间短，卵壳无色透明，无色素细胞让它成为成像研究的理想对象。来自杜鲁门州立大学的Timothy Walston和威斯康星大学麦迪逊分校的Jeff Hardin献上了一种简便的方法，能够制备活的线虫胚胎，用于显微镜观察。

 

这种方法将胚胎包埋在琼脂中，为持续成像提供了一个固定的方位。而其他技术会导致随机定位，让分析复杂化，并且单个分裂球的鉴定也更困难。琼脂包被法制备的胚胎很容易进行光学和共聚焦显微镜观察。

 

成像技术在近几年也得到了快速发展，出现了很多新技术和新应用。为此，冷泉港出版社出版了两本成像方面的新书。一本是《Imaging: A Laboratory Manual》，它包含了所有基本知识：光学、共聚焦、多光子、激光、照相机等，并覆盖了各种成像技术，从最基本的标记到高级、超高分辨率的成像。如果你们实验室的研究涉及成像，那么这是一本必备的书。

 

另一本则是第二版的《Imaging in Developmental Biology: A Laboratory Manual》。这几年，新技术彻底改变了我们对于动态过程的了解，因为它们能够在生物体发育的整个过程进行实时成像。这本书介绍了基本知识，观察各种模式生物的方法，并循序渐进地将读者带到前沿的成像技术。上面介绍的这两篇Protocol均来自本书。（生物通 余亮）